*天：

1. 將適合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置於(yu) LB或其他營養(yang) 豐(feng) 富的培養(yang) 基上，在37°C下過夜培養(yang)

2. 高溫滅菌大的離心瓶（250-500ml）以備第二天搖瓶用

3. 準備幾瓶滅菌水（總量約1.5升），保存於(yu) 冷凍室中以備第二天重懸浮細胞用

第二天：

4. 轉移0.2-1ml過夜培養(yang) 物至裝有500ml LB（或其他營養(yang) 豐(feng) 富的培養(yang) 基）的1-2升搖瓶

5. 37°C下劇烈振蕩培養(yang) 2-6小時

6. 定時監控OD600值（培養(yang) 1小時後每半小時測定一次）

7. 當OD600值達到0.5-1.0時，從(cong) 搖床中取出搖瓶，置於(yu) 冰上冷卻至少15分鍾（需要的話這種方式可以存放培養(yang) 液數小時）

8. 細胞在4°C 5000g下離心15分鍾，棄上清液（如需要，沉澱可在4°C的10%甘油中保存一兩(liang) 天）

9. 用滅菌的冰水重懸浮細胞。先用渦旋儀(yi) 或吸液管重懸浮細胞於(yu) 少量體(ti) 積中（幾毫升），然後加水稀釋至離心管的2/3體(ti) 積。

10. 照上麵步驟重複離心，小心棄去上清液

11. 照上麵步驟用滅菌的冰水重懸浮細胞

12. 離心，棄上清液

13. 用20ml滅菌的、冰冷後的10%甘油重懸浮細胞

14. 照上麵步驟離心，小心棄去上清液（沉澱可能會(hui) 很鬆散）

15. 用10%甘油重懸浮細胞至zui終體(ti) 積為(wei) 2-3ml

16. 將細胞按150μl等份裝入微量離心管，於(yu) -80°C保存

轉化方法：

1. 在冰上解凍電感受態細胞添加1-10μl DNA，冰上培育約5分鍾

2. 添加1-3μl DNA，冰上培育約5分鍾

3. 轉移DNA/細胞混合物至冷卻後的2mm電穿孔容器（無泡）中

4. 加載P1000，準備好300μl LB 或 2xYT

5. 對電穿孔容器進行脈衝(chong) （200 歐姆， 25μFd，2.5 千伏）（檢查時間常數，應該在3以上）

6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至電穿孔容器中

7. 37°C下培養(yang) 細胞40分鍾至1小時以複原

8. 轉移細胞至適當的選擇培養(yang) 基上培養(yang)

詳情請看：