摘要：
1 標本的采取和保存 可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體(ti) 液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體(ti) 或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如血清、尿液），有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為(wei) 標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等於(yu) 血清。製備血漿標本需借助於(yu) 抗凝

相關(guan) 專(zhuan) 題ELISA免疫實驗技術
1 標本的采取和保存 可用作elisa測定的標本十分廣泛，體(ti) 液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體(ti) 或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液)，有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為(wei) 標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等於(yu) 血清。製備血漿標本需借助於(yu) 抗凝劑，而血清標本隻要待血清自然凝固、血塊收縮後即可取得。除特殊情況外，在醫學檢驗中均以血清作為(wei) 檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會(hui) 釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為(wei) 標記的ELISA測定中，溶血標本可能會(hui) 增加非特異性顯色。 血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌汙染，菌體(ti) 中可能含有內(nei) 源性HRP，也會(hui) 產(chan) 生假陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內(nei) 測定的血清標本可放置於(yu) 4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解後，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉澱的血清標本應先離心或過濾，澄清後再檢測。反複凍融會(hui) 使抗體(ti) 效價(jia) 跌落，所以測抗體(ti) 的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。
2 試劑的準備 按試劑盒說明書(shu) 的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用於(yu) 洗滌的，應為(wei) 新鮮的和高質量的。自配的緩衝(chong) 液應用pH計測量較正。從(cong) 冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與(yu) 室溫平衡後使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
3 加樣 在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，並注意不可濺出，不可產(chan) 生氣泡。 加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以免發生交叉汙染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋後再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本，然後在微型震蕩器上震蕩1分鍾以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。
4 保溫 在ELISA中一般有兩(liang) 次抗原抗體(ti) 反應，即加標本和加酶結合物後。抗原抗體(ti) 反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為(wei) 溫育(incubation)，有人稱之為(wei) 孵育，在ELISA中似不恰當。 ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體(ti) 的結合隻在固相表麵上發生。以抗體(ti) 包被的夾心法為(wei) 例，加入板孔中的標本，其中的抗原並不是都有均等的和固相抗結合的機會(hui) ，隻有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與(yu) 抗體(ti) 接觸。這是一個(ge) 逐步平衡的過程，因此需經擴散才能達到反應的終點。在其後加入的酶標記抗體(ti) 與(yu) 固相抗原的結合也同樣如此。這就是為(wei) 什麽(me) ELISA反應總是需要一定時間的溫育。
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體(ti) 結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩(liang) 次抗原抗體(ti) 反應一般在37℃經1-2小時，產(chan) 物的生成可達。為(wei) 加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體(ti) 反應4℃更為(wei) *，以形成zui多的沉澱。但因所需時間太長，在ELISA中一般不予采用。