研生試劑-標準品的製備

1．標準品的製備：標準品的製備是非常複雜的問題，也是標記免疫分析中比較難於(yu) 製備的一個(ge) 成分。以下討論的是實驗室標準品(或商品化試劑中標準品)的製備。
   1）基質的製備：如前所述，作為(wei) 標準品的介質(基質)成分應與(yu) 被測樣品相同。對大多數用於(yu) 測定血清中某物質的標準品，應用不含

被測物質的零血清製備，以求反應的介質環境相當。但有時零值血清的製備十分困難，所以有些標準品用適當的緩衝(chong) 液製備，並在緩衝(chong) 液中加入一定量的載體(ti) 蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其與(yu) 樣品的介質環境相近。
   零值血清的製備方法有：
   (1)吸附法：血清中小分子物質如三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)等，可用活性炭吸附去除。這種方法簡便，但待測物質難以清除幹淨，而且大分子活性物質不能用此法進行製備。 
   (2)反複凍融法：對大分子活性物質可選用低值血清，經反複凍融使被測物質失活。用這種方法可使某些蛋白類激素大部分失活，但也難以得到真正的零值血清。 
   (3)親(qin) 和層析法：用特異性抗體(ti) 製備親(qin) 和層析柱，用以吸附被測抗原。用這種方法可以得到高質量的零值血清，但本法比較複雜而且成本也高。
    2）標準物純品的選擇：應選擇高化學純和高免疫純的純品作標準品。其中免疫純尤為(wei) 重要，在標準品中不應含有與(yu) 被測物質有交叉反應的物質。
    3）標準品的製備：先用零值血清配置高濃度的標準品，然後根據實驗係統的要求，用零值血清將高值血清稀釋至應有的濃度，製成符合預定要求的，由不同濃度組成的係列標準品。2．標準品的鑒定
1）免疫活性的鑒定：選用高特異性的抗血清分別作*標準品(如WHO的參考品或品)的待鑒定標準品的劑量反應曲線，並觀察兩(liang) 條曲線的平行性。如兩(liang) 條劑量反應曲線平行，說明兩(liang) 種物質對同一抗體(ti) 有相同的親(qin) 和力，即二者是同質性物質。如兩(liang) 條劑量反應曲線不平行，說明兩(liang) 種物質具有異質性，因而這一待鑒定的標準品是不能使用的。
2）濃度的標定：用已鑒定過的，免疫活性合格的標準品，與(yu) *的標準品作濃度相同的劑量反應曲線。此時，兩(liang) 條劑量反應曲線應該是基本重合的。如果兩(liang) 者平行但不重合，則取兩(liang) 條劑量反應曲線的50%結合處的相應劑量( ED50 )計算二者的換算係數，然後調整待鑒定標準品的濃度，直至使兩(liang) 條劑量反應曲線*或基本重合為(wei) 止。
3．標準品的計量：許多小分子抗原或半抗原已能得到純品或進行合成，它們(men) 對作為(wei) 標準品的要求可以得到基本的滿足，其計量多直接用單位體(ti) 積中的重量表示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。zui近WHO推薦用質量單位取代重量單位，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。對大分子的活性物質則比較複雜。由於(yu) 得不到的純品，故很難直接用單位體(ti) 積中的重量或單位體(ti) 積中的質量計量。因此，常用該物質的生物活性單位表示，如IU / L、mIU / L等。