研生試劑-常用佐劑的種類和製備

佐劑主要可分為(wei) 兩(liang) 種：一種本身具有免疫原性，如百日咳杆菌、抗酸杆菌（結核分枝杆菌）以及革蘭(lan) 陰性杆菌等；另一種本身無免疫原性，如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表麵活性劑等。目前應用zui多的是弗氏佐劑(Freund adjuvant)。
    1．弗氏佐劑 弗氏佐劑是目前動物實驗中zui常用的佐劑，分為(wei) 不*弗氏佐劑和*弗氏佐劑。不*弗氏佐劑是液體(ti) 石蠟與(yu) 羊毛脂混合而成，組分比為(wei) 1～5：1，可根據需要而定，通常為(wei) 2：1。不*佐劑中加卡介苗(zui終濃度為(wei) 2～20mg/ml)或死的結核分枝杆菌，即為(wei) *弗氏佐劑。上述佐劑經高壓滅菌後，低溫保存備用。 
    在免疫動物前，先將弗氏佐劑與(yu) 抗原按一定比例混合，製備成 "油包水"乳狀液。佐劑和抗原體(ti) 積比一般為(wei) 1：1。佐劑與(yu) 抗原乳化可按如下方法進行：
  （1） 研磨法：先將佐劑加熱並取適量放入無菌的玻璃研缽內(nei) ，待冷卻後再緩緩滴入等體(ti) 積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入後，繼續研磨一段時間，使之成為(wei) 乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適於(yu) 製備大量的佐劑抗原，缺點是研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大。 
  （2） 注射器混合法：將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩(liang) 個(ge) 注射器內(nei) ，兩(liang) 注射器之間以一細膠管相連，注意排淨空氣，然後交替推動針管，直至形成粘稠的乳劑為(wei) 止。本法優(you) 點是容易做到無菌操作，適用於(yu) 製備少量的抗原乳劑。 製備好的乳化劑經鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴狀浮於(yu) 水麵，即乳化*，為(wei) 合格的油包水劑。
    2．氫氧化鋁佐劑 取5%硫酸鋁溶液250ml，在強烈攪拌下加入5%氫氧化鈉溶液100ml，用生理鹽水離心洗滌沉澱2次，再懸入生理鹽水中使達250ml。免疫接種時，取適量氫氧化鋁佐劑加等體(ti) 積抗原即可免疫。 
    3．明礬佐劑 鉀鋁礬(硫酸鋁鉀)在一定pH條件下產(chan) 生氫氧化鋁膠體(ti) 吸附抗原而產(chan) 生佐劑效應。製備方法是用生理鹽水溶解蛋白質抗原，在攪拌下緩慢滴入一定量10%硫酸鋁鉀溶液，用NaOH調pH到6．5，此時溶液變成乳狀懸液，離心後去掉上清液，沉澱用生理鹽水洗滌二次，加入硫柳汞防腐，4℃保存備用。明礬佐劑一般用於(yu) 肌肉注射，皮下注射容易引起肉芽腫和膿腫。 
    4．脂質體(ti) 脂質體(ti) 包封抗原後，可使抗原延緩釋放，並且脂質體(ti) 顆粒有刺激機體(ti) 免疫反應的作用。因此，用脂質體(ti) 包封的抗原免疫動物可提高免疫效果。