神經細胞(神經元〕不易培養(yang) ,隻有在適宜情況下,如接種在膠原底層上,或加入神經生長因子和膠質細胞因子時,可出現一定程度的分化,長出突起等現象,但很難使之增值。而神經膠質細胞是神經組織中比較容易培養(yang) 的成分。
神經膠質細胞培養(yang) 方法如下:
1、從(cong) 手術室無菌取腦髓灰質或白質後,仔細剝除腦膜、血管和纖維成分,置Hanks液中漂洗一、二次。
2、置於(yu) 30—50倍體(ti) 積的Hanks液中,此時腦組織比較柔軟,反複吹打即製成細胞懸液。
3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鍾後,細胞或細胞團快自然下沉,脂肪等雜物易漂浮,可吸除上層、反複二、三次,即可排除脂肪成分和其它碎塊並獲較多細胞成分。
4、在沉降物中加入適量培養(yang) 液,通過紗網成紗布過濾,計數並調整細胞密度。
5、接入培養(yang) 瓶或皿中,置5%CO2溫箱中培養(yang) 。
該細胞適應環境過程較長,接種後貼壁較慢。貼壁後短期內(nei) 也可能不見細胞分裂現象,然而一旦生長後即能迅速進入旺盛的增殖狀態。細胞傳(chuan) 代可以0.25%胰酶消化處理。