293細胞培養(yang) 基的特性：

    1、293細胞明顯適應酸性環境,pH值在6.9～7.1時,可順利貼壁生長, 換液時動作要輕。一般用高糖的DMEM培養(yang) 基。

　　2、傳(chuan) 代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與(yu) 0.25%Trypsin消化，生長良好細胞，培養(yang) 瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表麵,即將其吸除或棄去消化30s，然後吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細胞變圓,就可加DMEM終止消化，反複吹打至細胞全成單個(ge) 懸浮細胞即可。12小時-24小時90%以上細胞貼壁。293細胞傳(chuan) 代時機為(wei) 達80-90%匯合，傳(chuan) 代比例為(wei) 1：3。

　　3、293細胞在低代時容易貼壁，生長良好，在傳(chuan) 到幾十代以後，易聚集成團，且貼壁不牢，用PBS衝(chong) 洗時即可能脫落，即使消化後也不容易吹打成單細胞懸液，購入時先大量凍存。

　　4、複蘇293細胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細胞冷凍後複蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yang) 瓶待細胞長滿瓶底的70%～80%時消化凍存,複蘇時將其全部接種至2個(ge) 50ml瓶中時較為(wei) 合適。剛複蘇的293貼壁很慢，複蘇接種後24小時內(nei) ,應盡量減少觀察細胞次數或不作觀察,以免因晃動而影響細胞貼壁。複蘇後48小時左右觀察貼壁情況並進行更換培養(yang) 基比較合適,如果用一次性塑料培養(yang) 瓶可增加細胞貼壁牢度。換液前宜將培養(yang) 基預熱。

　　5、轉染：體(ti) 外應用293細胞進行細胞轉染時，如果是采用磷酸鈣轉染，一定要注意293細胞不要全部長滿細胞培養(yang) 盤，長滿細胞時加入磷酸鈣就會(hui) 使293細胞大片的脫落，是當293生長到1/2或2/3時進行磷酸鈣轉染，可以避免細胞的大量脫落。 

實驗經驗分享：

    1、用大瓶培養(yang) 較小瓶要好，可能是更有利於(yu) 293均勻的分布，利於(yu) 營養(yang) 的攝取

　　2、培養(yang) 液要新鮮，每次隻配1000ml，分為(wei) 2-4瓶，不用的液，凍存在-20度，

　　3、要及時傳(chuan) 代，是細胞基本鋪滿培養(yang) 瓶底部，但是細胞之間還沒有*貼緊，總是多少有空隙的時候。

　　4、如果細胞貼壁不好，可能是消化過久，或是培養(yang) 瓶不夠幹淨，當然要除外細胞汙染。

　　5、如果使用用玻璃培養(yang) 瓶或皿，可以采用高壓滅菌的0.2%明膠溶液預處理培養(yang) 瓶/培養(yang) 皿，方法是將明膠加入培養(yang) 皿，使之浸泡到底麵的各個(ge) 部分，然後吸出，置超淨台內(nei) 晾幹即可使用。這樣處理後細胞貼壁效果好且鏡下細胞立體(ti) 感強。如果是新的塑料瓶就不用處理。