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細胞培養基傳代轉讓方法及分析色譜技術
更新時間:2014-07-25   點擊次數:813次

細胞培養(yang) 基傳(chuan) 代轉讓方法:

    (1) 、細胞試驗準備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養(yang) 皿,離心管。

  (2) 、棄掉皿中的培養(yang) 基,用1ml的PBS溶液洗滌兩(liang) 次。

  (3) 、用Tip頭加入1ml Trypsin液,消化1分鍾(37。C,5%CO2 )。用手輕拍培養(yang) 瓶壁,觀察到細胞*從(cong) 壁上脫落下來為(wei) 止。

  (4) 、加入1ml的含血清培養(yang) 基終止反應。

  (5) 、用Tip頭多次吹吸,使細胞*分散開。

  (6) 、將培養(yang) 液裝入離心管中,1000rpm離心5min。

  (7) 、用培養(yang) 液重懸細胞,細胞計數後選擇0.8X106個(ge) 細胞加入一個(ge) 35mm培養(yang) 皿。

  (8) 、將合適體(ti) 積*培養(yang) 液加入離心管中,混勻細胞後輕輕加入培養(yang) 皿中,使其均勻分布。

  (9) 、將培養(yang) 皿轉入CO2培養(yang) 箱中培養(yang) ,第二天轉染。 

    細胞分析色譜是製備色譜的基礎。當我們(men) 在分析色譜上取得了良好的分離效果時,可以將其放大,應用到製備色譜上,由此,我們(men) 需要考慮調整上樣量,流速,梯度。

  1、上樣量的調整:他與(yu) 分析色譜柱和製備色譜柱的柱長和柱內(nei) 徑有關(guan) :

  具體(ti) 關(guan) 係時;製備柱上樣量/分析柱上樣量=製備豬場/分析柱長*製備柱內(nei) 徑的平方/分析柱內(nei) 徑的平方。

  2、流速的調整:

  製備柱流速/分析柱流速=製備柱體(ti) 積/分析柱體(ti) 積=製備柱長/分析柱長*製備柱內(nei) 徑的平方/分析柱內(nei) 徑的平方。

  3、梯度的調整:

  製備柱梯度/分析柱梯度=製備柱體(ti) 積/分析柱體(ti) 積*製備柱流速/分析柱流速。

 

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