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羊水細胞培養基在體外培養製備方法
更新時間:2014-07-29   點擊次數:849次

    羊水中含有胎兒(er) 脫落的上皮細胞,可在體(ti) 外培養(yang) 用以分析胎兒(er) 染色體(ti) 核型。目前國內(nei) 外大都采用腹腔羊膜穿刺術,妊娠12-30周的羊水細胞均可成功。羊膜腔穿刺取羊水行染色體(ti) 分析,*孕周為(wei) 16周左右。因此時羊水增長快,羊水中細胞較多,細胞培養(yang) 易於(yu) 生長,而且不易損傷(shang) 胎兒(er) 。國內(nei) 多數選擇的穿刺時間在妊娠的第16-30周。國外現已較多地采用妊娠早期的羊膜穿刺,但需在B超下定位及穿刺。羊水量按妊娠時間大致計算(1ml/w)。資料表明,穿刺病例的妊娠結局、分娩方式、胎兒(er) 的出生體(ti) 重等與(yu) 未穿刺無明顯差異。

  (1)采樣:選擇妊娠13-14周婦女,在無菌條件下抽取羊水5ml,立即注入無菌離心管中;

  (2)收集:離心分離細胞,1000rpm10分鍾,去上清,留0.5ml,輕打混勻;

  (3)接種:30mm皿中放蓋玻片1張,每片滴混勻的細胞液1-2滴,置培養(yang) 箱內(nei) 培養(yang) 30-60分鍾;

  (4)培養(yang) :取出後從(cong) 蓋玻片外加培養(yang) 液2ml,靜置培養(yang) 48小時後觀察細胞生殖狀況並定時換液,5-10天後,可見大量成纖維細胞或上皮樣細胞生長;

  (5)終止培養(yang) :當有大量圓形發亮細胞出現時,加秋水仙素0.02-0.04ug/ml,作用10-12小時;

  (6)低滲:倒掉培養(yang) 液,加預溫37℃0.075MKCL溶液5ml,37℃溫育30分鍾,鏡下可見脹大的羊水細胞,加0.5-1ml 3∶1甲醇:冰醋酸固定液預固定;

  (7)固定:倒掉低滲液,加5ml固定液固定30分鍾以上,反複3次;

  (8)幹燥:將附有細胞的蓋玻片斜放於(yu) 皿中,置80℃烤箱處理2-3小時;

  (9)膠片:將附有細胞的蓋玻片用樹脂膠封固於(yu) 玻片上,正麵朝外,小心細胞破壞。

 

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