方法一 雙抗體(ti) 夾心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩衝(chong) 液將抗體(ti) 稀釋至蛋白質含量為(wei) 1~10μg/ml。在每個(ge) 聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過液。次日,棄去孔內(nei) 溶液,用洗滌緩衝(chong) 液洗3次,每次3分鍾。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於(yu) 上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然後洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體(ti) :於(yu) 各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(ti) (經滴定後的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:於(yu) 各反應孔中加入臨(lin) 時配製的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鍾。
5. 終止反應:於(yu) 各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可於(yu) 白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nei) 顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為(wei) 無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀(yi) 上,於(yu) 450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零後測各孔OD值,若大於(yu) 規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為(wei) 陽性。
方法二 間接法
1.用包被緩衝(chong) 液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過液;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體(ti) )0.1ml於(yu) 上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)於(yu) 反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(ti) (抗抗體(ti) )0.1ml;
5.37℃孵育30-60分鍾,洗滌;
6.’zui後一遍用DDW洗滌。
小鼠一氧化氮合成酶(NOS)xl18luck新利 Mouse nitric oxide synthase,NOS xl18luck新利
小鼠誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)xl18luck新利 Mouse inducible nitric oxide synthase,iNOS xl18luck新利
小鼠內(nei) 皮型一氧化氮合成酶(eNOS)xl18luck新利 Mouse Endothelial nitric oxide synthase,eNOS xl18luck新利
小鼠組胺(HIS)xl18luck新利 Mouse Histamine,HIS xl18luck新利
小鼠脂蛋白相關(guan) 磷脂酶A2(Lp-PL-A2)xl18luck新利 Mouse lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 xl18luck新利
小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)xl18luck新利 Mouse Heat Shock Protein 90,Hsp-90 xl18luck新利
小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)xl18luck新利 Mouse Heat Shock Protein 70,Hsp-70 xl18luck新利
小鼠脂聯素(ADP)xl18luck新利 Mouse adiponectin,ADP xl18luck新利
小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)xl18luck新利 Mouse Heat Shock Protein 40,Hsp-40 xl18luck新利
小鼠β澱粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)xl18luck新利 Mouse amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 xl18luck新利
小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)xl18luck新利 Mouse interleukin 8,IL-8 xl18luck新利
小鼠細胞周期素D3(Cyclin-D3)xl18luck新利 Mouse Cyclin-D3 xl18luck新利
小鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)xl18luck新利 Mouse Cyclin-D2 xl18luck新利
小鼠雌激素(E)xl18luck新利 Mouse estrogen,E xl18luck新利
小鼠細胞周期素D1(Cyclin-D1)xl18luck新利 Mouse Cyclin-D1 xl18luck新利
小鼠髓磷脂堿性蛋白(MBP)xl18luck新利 Mouse myelin basic protein,MBP xl18luck新利
小鼠轉化生長因子α(TGF-α)xl18luck新利 Mouse transforming growth factor α,TGF-α xl18luck新利
小鼠甲種胎兒(er) 球蛋白/甲胎蛋白(AFP)xl18luck新利 Mouse Alpha-fetoprotein,AFP xl18luck新利
小鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)xl18luck新利 Mouse Prostatic Acid Phosphatase,PAP xl18luck新利
小鼠前列腺特異性抗原(PSA)xl18luck新利 Mouse prostate specific antigen,PSA xl18luck新利