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生物試劑揭示免疫組化中抗體選擇要求
更新時間:2014-09-28   點擊次數:722次

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(1)選擇單克隆還是多克隆抗體(ti) 。由一種克隆產(chan) 生的特異性抗體(ti) 叫做單克隆抗體(ti) ,單克隆抗體(ti) 能目標明確地與(yu) 單一特異抗原決(jue) 定簇結合,就象導*地命中目標一樣。另一方麵,即使是同一個(ge) 抗原決(jue) 定簇,在機體(ti) 內(nei) 也可以由好幾種克隆產(chan) 生抗體(ti) ,形成好幾種單克隆抗體(ti) 混雜物,稱為(wei) 多克隆抗體(ti) 。在抗原抗體(ti) 反應中,一般單克隆抗體(ti) 特異性強,但親(qin) 和力相對小,檢測抗原靈敏度相對較低;而多克隆抗體(ti) 特異性稍弱,抗體(ti) 的親(qin) 和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等有所避免)。

(2)種屬來源。一般家兔來源的抗體(ti) 多是多克隆;而小鼠來源的抗體(ti) 多是單克隆,但也有另外。這條主要要與(yu) 後麵的二抗來源相匹配。

(3)是檢測什麽(me) 種屬的抗原,即species reactivity。這一點很重要,一般說明書(shu) 上都有注明,如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。

(4)能否做免疫組化。一般一抗說明書(shu) 都會(hui) 注明做WB、IHC、ICC、IF等,建議選擇注明的抗體(ti) ,因為(wei) 一般都是經過文章證明。

(5)檢測標本類型。用於(yu) 檢測石蠟切片還是冰凍切片,一般能做石蠟切片的抗體(ti) ,可能都可以用來檢測冰凍切片,但能做冰凍切片的抗體(ti) ,不一定能檢測石蠟切片中的抗原。

(6)。國外抗體(ti) 商原裝抗體(ti) 質量一般沒問題,但有點貴;而國內(nei) 分裝用的一抗工作液,價(jia) 格便宜,但有時結果的穩定性和重複性稍差,尤其不同批次重複性較差。

(7)價(jia) 格與(yu) 質量的矛盾。一抗原裝質量可能會(hui) 好點,因為(wei) 許多一抗避免反複凍融,且在稀釋液中穩定性較差(若時間長),但價(jia) 格較貴。

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(1)種屬來源。主要根據一抗種屬來源來決(jue) 定購買(mai) 二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買(mai) 抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。

(2)標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標記的二抗,以與(yu) 後麵的SP結合反應;而免疫熒光染色就需要購買(mai) 不同熒光素標記的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。這主要與(yu) 後麵有無三抗和三抗種類有關(guan) 。

(3)選擇IgM還是IgG。一般一抗是IgM,那麽(me) 二抗就選擇IgM;反之,一抗是IgG,則二抗選擇IgG。

 

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