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xl18luck新利揭示蛋白質純化與結晶的培養原理
更新時間:2014-10-10   點擊次數:920次

     獲得的晶體(ti) 結構的*個(ge) 瓶頸,就是製備大量純化的蛋白質(>10mg),其濃度通常在10mg/ml以上,並以此為(wei) 基礎進行結晶條件的篩選。運用重組基因的技術,將特定基因以選殖(clone)的方式嵌入表現載體(ti) 內(nei) ,此一載體(ti) 通常具有易於(yu) 調控的特性。之後再將帶有特定基因的載體(ti) 送入可快速生長的菌體(ti) 中,如大腸杆菌,在菌體(ti) 快速生長的同時,也大量表現載體(ti) 上的基因所解譯出之蛋白質。一般而言純度越高的比較有機會(hui) 形成晶體(ti) ,因此純化蛋白質的步驟就成為(wei) 一個(ge) 重要的決(jue) 定因素。

    在取得高純度的溶液後,接下來就是晶體(ti) 的培養(yang) 。蛋白質晶體(ti) 與(yu) 其他化合物晶體(ti) 的形成類似,是在飽和溶液中慢慢產(chan) 生的,每一種蛋白質養(yang) 晶的條件皆有所差異,影響晶體(ti) 形成的變量很多,包含化學上的變量,如酸堿度、沉澱劑種類、離子濃度、蛋白質濃度等;物理上的變數,如溶液達成過飽和狀態的速率、溫度等;及生化上的變數,如所需的金屬離子或抑製劑、蛋白質的聚合狀態、等電點等,皆是養(yang) 晶時的測試條件。截至目前為(wei) 止,並無一套理論可以預測結晶的條件,所以必須不斷測試各種養(yang) 晶溶液的組合後,才可能得到一顆的單一晶體(ti) 。

    晶體(ti) 的培養(yang) ,通常是利用氣相擴散法(Vapor Diffusion 
Method)的原理來達成;也就是將含有高濃度的蛋白質(10~50mg/ml)溶液加入適當的溶劑,慢慢降低蛋白質的溶解度,使其接近自發性的沈澱狀態時,蛋白質分子將在整齊的堆棧下形成晶體(ti) 。舉(ju) 例來說,我們(men) 將蛋白質溶於(yu) 低濃度(~1.0M)的硫酸銨溶液中,將它放置於(yu) 一密閉含有高濃度(~2.0M)硫酸銨溶液的容器中,由氣相平衡,可以緩慢提高溶液中硫酸銨的濃度,進而達成結晶的目的。

    晶體(ti) 在外觀上與(yu) 其他晶體(ti) 並無明顯不同之處,但在晶體(ti) 的內(nei) 部,卻有很大的差異。一般而言,蛋白質晶體(ti) 除了蛋白質分子外,其他的空間則充滿約40%至60%之間的水溶液,其液態的成分不僅(jin) 使晶體(ti) 易碎,也容易使蛋白質分子在晶格排列上有不規則的情形出現,造成晶體(ti) 處理時的困難及繞射數據上的搜集不易等缺點。但也由於(yu) 高含水量的特性,讓蛋白質分子在晶體(ti) 內(nei) 與(yu) 水溶液中的狀態,極為(wei) 相似。所以由晶體(ti) 所解出的蛋白質結構,基本上可視為(wei) 自然狀態下的結構。

250克    Bile Esculin Azide Agar    膽鹽七葉苷疊氮鈉瓊脂    用於(yu) 腸球菌的快速選擇性分離培養(yang) 和計數
250克    M-Enerococcus Agar    M-腸球菌瓊脂    用於(yu) 濾膜法或直接平板法,從(cong) 自來水、食品或其他標本中分離腸球菌
250克    BPW    緩衝(chong) 蛋白腖水增菌液    沙門氏菌前增菌培養(yang) 和李氏菌前增菌培養(yang)
250克    TSYEB    胰酶大豆酵母浸膏肉湯    用於(yu) 單核細胞和李斯特菌增菌培養(yang)
250克    TSYEA    胰酶大豆酵母浸膏瓊脂    用於(yu) 單核細胞和李斯特氏菌的分離培養(yang)
250克    Listeria Enrichment Broth Base    李氏菌增菌肉湯(LB1,LB2)基礎    李氏菌二步增菌
250克    PALCAM Agar    PALCAM瓊脂    單增李氏菌的選擇性分離
250克    Oxford Agar Base    OXA基礎    單增李氏菌的選擇性分離
250克    LPM Agar    李氏LPM瓊脂    單增李氏菌的選擇性分離
250克    Half Fraser Medium    Half Fraser培養(yang) 基    李氏菌的增菌培養(yang)
250克    Motility Test Medium(Semisolid)    SIM培養(yang) 基    李氏菌動力觀察,H抗原位相變異試驗;硫化氫、動力、吲哚試驗
250克    Modified Mcbride Agar Base    改良McBride瓊脂培養(yang) 基    單增李氏菌選擇性分離
250克    Fraser Medium    Fraser培養(yang) 基    李氏菌的增菌培養(yang)
250克    MBPW    改良緩衝(chong) 蛋白腖水    李氏菌的增殖
250克    Citrate Agar    檸檬酸鹽培養(yang) 基    大腸杆菌和產(chan) 氣杆菌的鑒別
250克    Urease Agar Base    尿素瓊脂培養(yang) 基基礎    細菌脲酶檢測,腸杆菌鑒別
100克    Potassium Cyanide Medium Base    KCN培養(yang) 基基礎    用於(yu) 鑒別腸道細菌KCN抑製試驗
250克    MR VP Broth    MR-VP試驗用培養(yang) 基    腸杆菌科細菌的甲基紅和VP試驗

 

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