中文名稱：人生長因子（HGH）xl18luck新利

英文名稱：Human growth hormone,HGH ELISA Kit  

標本收集注意事項：
1）在收集標本前都必須有一個(ge) 完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。
2）我們(men) 提倡新鮮標本盡早檢測，對收集後及時進行檢測。

樣品類型：標本必須為(wei) 液體(ti) ，不含沉澱。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yang) 上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(ge) 標本量收集體(ti) 積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書(shu) 。 

樣品采集：收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的標本，儲(chu) 存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝後放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反複凍融。標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個(ge) 月。-70度可保存6個(ge) 月。部分激素類標本需添加抑肽酶。

液體(ti) 類標本：
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yang) 上清等。
1）血清：
室溫血液自然凝固10-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
2）血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為(wei) 抗凝劑，混合10-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4）細胞培養(yang) 上清：
A、檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/ 分）。仔細收集上清。
B、檢測細胞內(nei) 的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wan) /ml左右。通過反複凍融，以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
5）組織標本：
切割標本後，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用。

標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融。

操作步驟
方法一　用於(yu) 檢測未知抗原的雙抗體(ti) 夾心法:
1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩衝(chong) 液將抗體(ti) 稀釋至蛋白質含量為(wei) 1～10μg／ml。在每個(ge) 聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過*。次日，棄去孔內(nei) 溶液，用洗滌緩衝(chong) 液洗3次，每次3分鍾。（簡稱洗滌，下同）。
2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於(yu) 上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然後洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3.　加酶標抗體(ti) ：於(yu) 各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(ti) （經滴定後的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
4.　加底物液顯色：於(yu) 各反應孔中加入臨(lin) 時配製的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鍾。
5.　終止反應：於(yu) 各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　結果判定：可於(yu) 白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nei) 顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為(wei) 無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀(yi) 上，於(yu) 450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零後測各孔OD值，若大於(yu) 規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為(wei) 陽性。
 
方法二　用於(yu) 檢測未知抗體(ti) 的間接法：
用包被緩衝(chong) 液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過*。次日洗滌3次。
↓
加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體(ti) ）0.1ml於(yu) 上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）
↓
於(yu) 反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(ti) （抗抗體(ti) ）0.1ml，37℃孵育30-60分鍾，洗滌,zui後一遍用DDW洗滌。