本試劑盒僅(jin) 供研究使用。

使用目的：

本試劑盒用於(yu) 測定雞血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中雞病毒性腸炎病毒（DEV）表達。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中雞病毒性腸炎病毒（DEV）表達。用純化的雞病毒性腸炎病毒（DEV）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相體(ti) ，可與(yu) 樣品中病毒性腸炎病毒（DEV）相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分後再與(yu) HRP標記的雞病毒性腸炎病毒（DEV）抗體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度（OD值），與(yu) CUTOFF值相比較，從(cong) 而判定標本中雞病毒性腸炎病毒（DEV）的存在與(yu) 否。

試劑盒組成

標本要求

1．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然後在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。  

4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以內(nei) 進行。

操作程序總結：

計算和結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨(lin) 界值（CUT OFF）計算：臨(lin) 界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD值< 臨(lin) 界值（CUT OFF）者為(wei) 雞病毒性腸炎病毒（DEV）陰性

陽性判定：樣品OD值≥ 臨(lin) 界值（CUT OFF）者為(wei) 雞病毒性腸炎病毒（DEV）陽性

注意事項

1．操作嚴(yan) 格按照說明書(shu) 進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4．封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準，使用雙波長檢測時，參考波長為(wei) 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。終止液為(wei) 2M的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(ge) 月