T淋巴細胞原理操作方法

（一）原理 
混合單個(ge) 核細胞懸液在通過尼龍毛柱時，B細胞、漿細胞、單核細胞和一些輔助細胞被選擇性粘附於(yu) 尼龍毛上，而多數T細胞則通過尼龍毛柱，這是獲得富含T細胞群的有效方法。

（二）材料及試劑
1．尼龍毛（Femwall Laboratories,LP－1 Leukoqak leukocyte Filters）。
2．燒杯、鋁箔、漏鬥、一次性手套等。
3．裝填尼龍毛柱，一次性注射器。
4．取自然沉降的上層血漿，過聚蔗糖—泛影葡胺分層液後，獲取的血漿和分層液之間的單個(ge) 核細胞層。

（三）T淋巴細胞操作方法 
1．尼龍毛的清洗與(yu) 幹燥
（1）戴上已經洗去滑石粉的一次性手套，將尼龍毛（1包或2包，每包35g）放入燒杯中，加入蒸餾水或去離子水，用鋁箔蓋上燒杯並煮沸約10min。
（2）冷卻至常溫，倒入漏鬥內(nei) ，使水滴幹。
（3）重複（1）、（2）步驟6次。
（4）將尼龍毛攤在鋪有紗布的方盤內(nei) ，37℃溫箱幹燥2～3天後，貯藏在帶蓋的方盤內(nei) 。
2．裝尼龍毛柱
（1）取50ml玻璃注射器，拔去注射芯，在注射器頭上套一段帶夾子的膠管。
（2）將尼龍毛梳理，並適當折疊，以適應注射器的直徑，填入注射器內(nei) ，約20ml的體(ti) 積。
（3）將填好尼龍毛的注射器連同注射器芯一起包好，高壓滅菌。
3．細胞分離
（1）將注射器固定在支架上，倒入37℃的細胞培養(yang) 液，關(guan) 閉閥門一定時間，然後打開閥門，放掉細胞培養(yang) 液，以清洗幾次尼龍毛，關(guan) 上閥門。
（2）將要分離的細胞液用預先加溫的培養(yang) 液稀釋成適當的濃度，約5.00×107個(ge) 細胞／ml。
（3）將細胞液倒入注射器內(nei) ，使之沒過尼龍毛柱。蓋上注射器，37℃溫育45min
至1h。
（4）打開下口，緩慢放流（1滴／min），收集於(yu) 離心管中。
（5）離心，即獲所需的T淋巴細胞。
（6）關(guan) 閉注射器下口，於(yu) 注射器內(nei) 加入0.85％冰冷生理鹽水，振蕩，並套上注射器芯，打開下口，使勁推出注射器內(nei) 液體(ti) ，即獲得粘附於(yu) 尼龍毛上的B淋巴細胞、漿細胞、巨噬細胞等。

（四）T淋巴細胞注意事項
1．此種分離法，T淋巴細胞也常有一部分被吸附，吸附的多少與(yu) 尼龍毛的質量有關(guan) ，與(yu) 裝柱的鬆緊也有關(guan) 係。
2．此法的T淋巴細胞的回收率約20％～30％。
3．用過的尼龍毛可回收，以鹽水洗滌，然後浸入0.1Mol/L的HCl中過*，然後再同前法清洗