程序
(1) 壓跡：根據樣品的數量剪取一片硝酸纖維素膜或混合纖維素膜。用直徑3～5mm圓形打孔
器(瓊脂平板打孔器)，在膜的光滑麵按順序壓上痕跡，作為(wei) 點樣部位。將膜置蒸餾水中浸泡，待*浸濕後，取出室溫自然幹燥。
(2) 點樣：用微量移液器分別吸取1～2μl(或用玻璃棒、毛細管蘸一滴)被檢抗原液，滴於(yu)
圓圈內(nei) ，自然幹燥。為(wei) 增加抗原吸附量，也可在點樣幹燥後，再進行第二次點樣。同時作陰、陽性抗原對照。
(3) 封閉：將膜置平皿或小池內(nei) ，加入封閉劑，37℃浸泡30～60min。取出稍置片刻，用洗液漂洗2次，晾幹。
(4) 與(yu) AFMcAb或OFPcAb反應：用保溫液對AFMcAb或OFPcAb作適當稀釋，加入反應池中，於(yu) 37℃覆蓋膜2h。
(5) 洗滌：用洗滌液漂洗膜3次，每次3min，晾幹。
(6) 與(yu) 酶結合物反應：凍幹辣根過氧化物酶標記兔抗BALB/c鼠抗體(ti) 用保溫液作1∶80稀釋，37℃覆蓋膜1h。
(7) 洗滌：3次，方法同上。
(8) 顯色：將膜浸入底物溶液中，避光染色5～15min。
(9) 終止反應：用蒸餾水漂洗濾膜，晾幹。
3 結果判定在陰、陽對照正常情況下，以在膜圓圈內(nei) 出現棕色斑點為(wei) 陽性，無色為(wei) 陰性。膜幹燥後，可長期保存。
在應用D間接法、雙抗體(ti) 夾心法等檢測方法時，如果膜上包被的是已知的標準抗原或抗體(ti) ，而不是被檢樣品，為(wei) 了操作方便，可將上述的“診斷膜"按壓跡剪成小片，置微量反應板的小孔中。在微孔中，“診斷膜"與(yu) 相應的被檢樣品和診斷液發生一係列的抗原抗體(ti) 反應和酶促反應。在試驗中，被檢樣品和診斷液的用量均為(wei) 每孔50μl，其他反應條件和操作法與(yu) 常規ELISA相同。
4 注意事項
1 點樣量不易過大，以免溢出壓跡圈外，造成各樣品混合，如要增加樣品吸附量，可在一次點樣幹燥後，再進行第2次點樣。
2 膜包被後，一定要封閉確實，防止抗原或抗體(ti) 的非特異性吸附，避免膜本底染色過深。
3 結果判定時，應與(yu) 陰、陽性對照斑點反複比較，盡量克服肉眼觀察所帶來的誤差。