直接測定DNA合成是增殖檢測的zui準確方法之一,是測定物質毒性、評估藥物安全評價(jia) 、細胞健康的基本方法,其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸類似物——BrdU進行檢測。因為(wei) 在細胞周期的S期,和細胞一起孵育的BrdU能滲入DNA分子中,再結合BrdU抗體(ti) 與(yu) 滲入DNA的BrdU特異性結合,就能夠檢測到DNA複製活躍的細胞。
但BrdU有一大缺點,就是需要變性DNA後才能與(yu) 抗體(ti) 結合,但這就破壞了DNA雙鏈結構,影響了其他染料的結合染色,導致染色彌散,準確性降低等問題。哈佛大學醫學院細胞生物學家Adrian Salic就認為(wei) :“為(wei) 了能夠暴露BrdU的抗原表位,必須用高濃度的鹽酸,乙酸或酶解,但經曆了如此嚴(yan) 重的處理後,細胞原本精巧細致的結構在顯微鏡下就變得慘不忍睹了。"
事實上,現在有一種新的檢測方法能避免這種情況的發生——EdU檢測。EdU (5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團在天然化合物中很少見,在細胞增殖時能夠插入正在複製的DNA分子中,基於(yu) EdU與(yu) 染料的共軛反應可以進行快速的增殖檢測分析,可以有效地檢測處於(yu) S期的細胞百分數。
BrdU 需要DNA 變性後才能與(yu) 抗體(ti) 結合,導致BrdU、Hoechst 染色彌散,邊緣模糊不清;
而EdU 邊緣清晰完整,檢測更靈敏、更準確EdU可以檢測新合成的DNA,而EU則可以檢測新合成的RNA。EU是一種尿嘧啶核苷類似物,能夠在RNA轉錄時期代替尿嘧啶( U )滲入正在合成的RNA分子,基於(yu) EU與(yu) Apollo?熒光染料的特異性反應進行RNA檢測。EU能夠在體(ti) 內(nei) 和體(ti) 外水平檢測時間和空間上RNA合成的變化,能夠更方便地研究RNA轉錄位點,結合相關(guan) 抗體(ti) 標記能夠檢測與(yu) RNA有相互作用的蛋白。結合EdU和EU進行檢測新合成的DNA和新合成的RNA,可以深入開展增殖、細胞周期、細胞毒性、DNA複製及修複、信號通路等方麵的研究。