細胞內(nei) 抗原的檢測過程與(yu) 表麵抗原檢測過程基本一致，隻是在與(yu) 一抗孵育前，需要預先對細胞用非離子去汙劑進行透化處理。

操作方法

1. 取已固定好的細胞爬片或甩片或經過預處理的組織切片（石蠟或冰凍切片）；

2. 用含0.2%TritonX-100或NP-40的PBS溶液透化固定後的細胞2min（室溫），有些標本可能需要長達15min，時間視抗原而定；

3. 餘(yu) 下步驟接上述“表麵抗原的檢測-間接免疫熒光法"步驟（2）；

注意事項

1. 在使用前，一抗二抗均應測試其合適的稀釋度。

2. 多聚甲醛的固定是不穩定的，標本經多聚甲醛固定後，應再用去汙劑處理，如果標本在水溶液中浸泡的時間過長，則會(hui) 使交聯結構解體(ti) 。因此，應避免固定後的標本在水溶液中浸泡的時間過長。

3. 信號微弱的解決(jue) 方法：

① 提高一抗和二抗的濃度以增強敏感性 ，這必須測試各種濃度抗體(ti) 的滴度；

② 延長一抗和二抗的孵育時間。由於(yu) 染色時抗原吸附在固相載體(ti) 上，抗原抗體(ti) 結合時間較在溶液中長。孵育時間可因實驗設計作適當調整，但少於(yu) 20min抗體(ti) 和抗原幾乎不能有效結合。在以上兩(liang) 點中，應摸索出一個(ge) *條件以產(chan) 生有效信號且保持良好的背景。這就需要反複試驗，因為(wei) 每組抗體(ti) 和抗原的情況會(hui) 有所不同；

③ 改變檢測方法，用共聚焦顯微鏡觀察，可提高敏感性。