緩衝(chong) 液

免疫化學中應用的緩衝(chong) 液種類較多，即使是同種緩衝(chong) 液，其濃度、pH、離子強度等也常不同。在此介紹幾種zui常用緩衝(chong) 液的配製。

1、0.2mol/L pH7.4磷酸鹽緩衝(chong) 液（Phosphate Buffer，PB）

試劑： NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O。

配製方法：配製時，常先配製0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，兩(liang) 者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸鹽緩衝(chong) 液（PB），根據需要可配製不同濃度的PB和PBS。

（1）0.2mol/L的NaH2PO4；稱取NaH2PO4·2H2O 31.2 g 或NaH2PO4·H2O 27.6g加重蒸水至1000ml溶解。

（2）0.2mol/L的Na2HPO4：稱取Na2HPO4·12H2O 71.632g（或Na2HPO4·7H2O 53.6g或Na2HPO4·2H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。

（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配製：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O，充分混合即為(wei) 0.2mol/L的PB（pH約為(wei) 7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通過改變二者的比例來加以調整，室溫保存即可。

2、0.01mol/L磷酸鹽緩衝(chong) 生理鹽水（Phosphate Buffered Saline, PBS）

試劑：0.2 mol/L PB　　　    50ml

   NaCl 　　　　　　　8.5～9g（約0.15mol/L）

   　重蒸水 　　　　　　至1000ml

配製方法：稱取NaCl8.5～9g及0.2mol/L的PB50ml，加入1000ml的容量瓶中，zui後加重蒸水至1000ml，充分搖勻即可。若擬配製0.02mol/L的PBS，則PB量加倍即可，依此類推。

PB和PBS是免疫化學實驗中zui為(wei) 常用的緩衝(chong) 液，0.01mol/L的PBS主要用於(yu) 漂洗組織標本、稀釋血清等，其pH應在7.25～7.35之間，否則需要調整。0.1mol/L的PB常用於(yu) 配製固定液、蔗糖等。一般情況下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀釋成0.01mol/L的PBS時，常可達到要求的pH值，若需調整pH，通常也是調PB的pH。

3、Karasson–Schwlt's磷酸鹽緩衝(chong) 液

試劑：  NaH2PO4·H2O            3.31g

     Na2HPO4·7H2O           33.77g

     　　重蒸水 　　　　　　　至1000ml

配製方法：同前。該緩衝(chong) 液主要用於(yu) 配製Zamboni's固定液。

4、0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl緩衝(chong) 液。

試劑：Tris(三羥甲基氨基甲烷)　　60.57g

   　1 N HCl　　　　　　　　　約420ml

   　重蒸水 　　　　　　　　　至1000ml

配製方法：先以少量重蒸水（300～500ml）溶解Tris，加入HCl後，用1N的HCl或1N的NaOH將pH調至7.6，zui後加重蒸水至1000ml。此液為(wei) 儲(chu) 備液，於(yu) 4℃冰箱中保存。免疫細胞化學中常用的Tris-HCl緩衝(chong) 液濃度為(wei) 0.05mol/L，用時取儲(chu) 備液稀釋10倍即可。

該液主要用於(yu) 配製Tris緩衝(chong) 生理鹽水（TBS）、DAB顯色液。

5、Tris緩衝(chong) 生理鹽水（Tris Buffered Saline，TBS）

試劑：0.5mol/L Tris-HCl緩衝(chong) 液　　　100ml

   　NaCl　　　　　　　　　　　3.5～9g（0.15mol/L）

  重蒸水　　　　　　　　　　　至1000ml

配製：先以重蒸水少許溶解NaCl，再加Tris-HCl緩衝(chong) 液，zui後加重蒸水至1000ml，充分搖勻使Tris終濃度為(wei) 0.05mol/L。

TBS主要用於(yu) 漂洗標本，常用於(yu) 免疫酶技術中。

6、Tris-TBS（TBS）

試劑：Triton X-100　　　　　　         　10ml（1%）或3ml（0.3%）

  　 0.5mol/L Tris緩衝(chong) 液（pH7.6）　　1000ml（50ml）或（0.2mol/L的PB）

    　NaCl　　　　　　　　　　　　　8.5～9g

    重蒸水　　　　　　　　　　　　至1000ml

配製方法：先以重蒸水少許溶解NaCl後，加入Triton X-100及Tris緩衝(chong) 液或（PB），zui後加重蒸水至1000ml，充分搖勻。

該液常用濃度為(wei) 1%及0.3%，前者主要用於(yu) 漂洗標本，後者主要用於(yu) 稀釋血清。

7、0.1mol/L（pH7.4）二甲胂酸緩衝(chong) 液

試劑：0.2mol/L二甲胂酸鈉　　　　　　500ml

    　0.1N HCl　　　　　　　　　　　28ml

   蒸餾水　　　　　　　　　　　　至1000ml

配製方法：先稱取二甲胂酸鈉（MW：214）42.8g，加蒸餾水至1000ml，使0.2mol/L的二甲胂酸鈉溶液；再取HCl1.7ml加蒸餾水至1000ml，配成0.1N，zui後取0.2mol/L二甲胂酸鈉溶液500ml及0.1N HCl28ml混合，加蒸餾水至1000ml，即為(wei) 0.1mol/L的二甲胂酸鈉緩衝(chong) 液。