細胞凍存方法

1．細胞：選對數生長期，收集細胞24小時前換液一次。

2．計數：按常規方法把細胞製成細胞懸液，計數，令細胞密度達5×106/ml，離心去上清，吸入離心管中。

3．凍存液：先用培養(yang) 液9分＋DMSO1分（或甘油）配成10％的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，然後用吸管輕輕吹打令細胞重懸。

4．分裝：分裝入無菌安剖中，每安剖加1.5毫升懸液。

5．封口：用塑料安剖時擰緊瓶口即可；如用火焰封閉安剖口後，仔細檢查，定要封嚴(yan) ，必要時可浸入藍色液中觀察，為(wei) 安全起見，把安剖縫入紗布小袋中，以防液氮浸入後，融解時因受熱發生爆炸傷(shang) 人；紗袋一端係以線繩，末端紮有小牌，注明：細胞名稱，凍存日期，以便日後查找。

細胞複蘇方法

1．從(cong) 液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴(yan) ，浸入了液氮，取出後因安剖內(nei) 液氮迅速氣化而發生爆炸，因此應帶有防護眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋並不時搖動，盡快解凍。

3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒後，淨化台上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養(yang) 液，吹打使懸浮。

4．低速離心（500～1000轉/分）5分鍾，取上清後再重複用培養(yang) 液漂洗、離心。

5．加入培養(yang) 液適當稀釋後，再移裝入培養(yang) 瓶中，置溫箱培養(yang) ，次日更換一次培養(yang) 液後再繼續培養(yang) 。