病毒轉化細胞實驗

(1)原理：很多病毒都有轉化的作用，尤以致癌病毒zui為(wei) 明顯。EB病毒(EBV)是近年來常用於(yu) 轉化細胞的病毒。該病毒對人二倍體(ti) 細胞的轉化效果，常用於(yu) 建立淋巴細胞永生細胞係。人外周血B淋巴細胞膜上有。EB病毒受體(ti) ，當EB病毒與(yu) 受體(ti) 結合後，B淋巴細胞可發生轉化，成為(wei) 體(ti) 外長期傳(chuan) 代生長的細胞係。

(2)材料

1)病毒：EB病毒液(取自培養(yang) 的B95—8細胞)。

2)轉化細胞：檸檬酸或肝素抗凝人外周血。

3)細胞培養(yang) 液：含20％胎牛血清的RPMI 1640。

4)抗生素：青黴素、鏈黴素和慶大黴素。

5)洗液：PBS。

(3)方法

1)血液製備：抗凝全血1～2ml，分裝於(yu) 15ml離心管中，每管O．5ml，置於(yu) 4℃冰箱中放置30min後，加入不含血清的RPMI1640離心洗一次，用含20％胎牛血清的培養(yang) 液製成細胞懸液。

2)EB病毒的獲得：培養(yang) 的B95—8細胞，10000r／min離心15min去除細胞碎片，再經24000r／min，離心90min獲得病毒沉澱，以1：100體(ti) 積培養(yang) 液溶解獲得EB病毒濃縮液。

3)EB病毒轉化：加入EB病毒液，O．3～0．5ml／管，37℃水浴30min～2h，並不時搖動，以利於(yu) 病毒吸附和並防止血凝塊產(chan) 生。

4)分裝入50ml培養(yang) 瓶中，同時補加培養(yang) 液，5ml／管，置入含5％CO2的37℃溫箱中培養(yang) 。

5)細胞培養(yang) 一周後再補入2ml培養(yang) 基。

6)每3～4d加液或半量換液，隨細胞數量增多，可分裝人大瓶中培養(yang) 。為(wei) 了提高轉化效率，常將全血凍存複蘇後采用。

(4)結果觀察與(yu) 鑒定：需每天鏡檢培養(yang) 物，開始培養(yang) 時，鏡下可見大量紅細胞，難以觀察到單核細胞。培養(yang) 5～7d後，單個(ge) 或成團的淋巴增殖迅速，成大團塊，呈懸浮生長，紅細胞已*消失，轉化完成。