酶聯免疫吸附法(ELISA)核小體(ti) 測定
凋亡細胞的DNA斷裂使質內(nei) 出現核小體(ti) 。核小體(ti) 由組蛋白及其伴隨的DNA片斷組成,可由ELISA法檢測。
(一)檢測步驟
1、將凋亡細胞裂解後高速離心,其上清液中含有核小體(ti) ;
2、在微定量板上吸附組蛋白體(ti) ’
3、加上清夜使抗組蛋白抗體(ti) 與(yu) 核小體(ti) 上的組蛋白結合‘
4、加辣過氧化物酶標記的抗DNA抗體(ti) 使之與(yu) 核小體(ti) 上的DNA結合’
5、加酶的底物,測光吸收製。
(二)用途
該法敏感性高,可檢測5*100/ml個(ge) 凋亡細胞。可用於(yu) 人、大鼠、小鼠的凋亡檢測。該法不需要特殊儀(yi) 器,適合基層工作,但是不能測定凋亡發生的絕多對量。
流式細胞儀(yi) 定量分析
(一)檢測原理
細胞發生凋亡時,其細胞膜的通透性也增加,但是其程度介於(yu) 正常細胞與(yu) 壞死細胞之間。利用這一特點,被檢測細胞懸液用熒光素染色,利用流式細胞儀(yi) 測量細胞懸液中細胞熒光強度來區分正常細胞、壞死細胞核凋亡細胞。
(二)應用價(jia) 值
流式細胞儀(yi) 檢測具有以下特點:
1)、檢測的細胞數量大,因此其反映群體(ti) 細胞的凋亡狀態比較準確
2)、可以做許多相關(guan) 性分析
3)、結合被檢測細胞的DNA含量的分析,可確定凋亡的所處的細胞周期