做ELISA實驗收集血漿樣本時為(wei) 什麽(me) 要加抗凝劑?顧名思義(yi) ,抗凝劑就是為(wei) 了防止血液凝固的。加了抗凝劑後,血液在一定的時間內(nei) 會(hui) 保持原來的物理化學狀態。如果沒加抗凝劑,血漿是凝聚在一起的,不好測定。常見的抗凝劑有哪些,各自又有什麽(me) 優(you) 點?
1.乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA)鹽
常用有鈉鹽或鉀鹽,能與(yu) 血液中鈣離子結合成螯合物,使Ca2+失去凝血作用,阻止血液凝固。
Na2C10H14O8N2+Ca2+→ CaC10H12O8N2+2Na++2H+
特點:對血形態、血小板計數影響很小(但影響血小板聚集)。不適於(yu) 凝血檢查、血小板功能試驗。
2.草酸鹽
常用有草酸鈉、草酸鉀、草酸銨,溶解後解離的草酸根離子能與(yu) 樣本中鈣離子形成草酸鈣沉澱,使Ca2+失去凝血作用,阻止血液凝固。2mg草酸鹽可抗凝lml血液。但不適於(yu) 凝血檢查。而且,草酸鹽濃度過高還會(hui) 導致溶血、改變血液pH,幹擾血漿鉀、鈉、氯和某些酶活性的測定。
雙草酸鹽抗凝劑:適用於(yu) 血細胞比容、CBC、網織紅計數等檢查,不適於(yu) 血小板計數、白細胞分類計數。
3.肝素
是加強抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)滅活絲(si) 氨酸蛋白酶作用,阻止凝血酶的形成,並阻止血小板聚集等作用,從(cong) 而阻止血液凝固。肝素是紅細胞透滲脆性試驗的理想抗凝劑。但不適於(yu) CBC、細胞形態學檢查。每毫升血液肝素用量為(wei) (15±2.5)U,多為(wei) 肝素鈉鹽或鉀鹽。
4.枸櫞酸鹽
常用的有枸櫞酸鈉,能與(yu) 血液中鈣離子結合形成螯合物,阻止血液凝固。枸櫞酸鹽抗凝劑的抗凝力不如上述抗凝劑。枸櫞酸鈉與(yu) 血液的抗凝比例為(wei) l:9或1:4.適用於(yu) 紅沉降率、凝血檢查,是輸血保養(yang) 液的成分。