鳴胚成纖維細胞具有相對容易獲得、增殖能力強、適應性強、良好的耐受性、性狀比較穩定等特點，使得其被廣泛地應用於(yu) 分子和生物學研究的許多方麵。

一，材料

1.孵育10d雞胚2隻。

2．培養(yang) 用液含10％CS的MEM、O．25％胰酶、PBS、D—Hanks液、CS等。

3．器皿與(yu) 儀(yi) 器鑷子、眼科剪、各種吸管、培養(yang) 瓶、顯微鏡、培養(yang) 皿、三角燒瓶、離心管、不鏽鋼網、細胞計數器等。

二、方法

1．取雞胚取10d雞胚於(yu) 蛋架上，用75％乙醇消毒蛋殼，用剪刀和鑷子去除氣室部蛋殼，用無菌彎頭小鑷輕輕取出雞胚，並放人無菌平皿中。

2．組織處理用彎頭小鑷夾起腹部皮膚，剪開腹腔和胸腔去除雞胚內(nei) 髒，留下的雞胚組織用Hanks液洗2次。然後將雞胚組織移人小三角燒瓶內(nei) ，用剪刀反複剪成lmm3大小的組織塊，用Hanks液洗2次。

3．消化將洗液上清液吸棄，根據沉下雞胚組織塊的多少，加入10倍量的O．25％胰酶，置37℃水浴中消化30min，消化時每隔5min搖動一次，使組織塊散開，視其組織碎塊變的疏鬆，從(cong) 水浴鍋中取出。用毛細管輕輕吸出消化液，用Hanks液洗3次，加10ml生長液(不加血清)，用吸管反複吹打，使細胞分散，然後將分散好的懸液通過不鏽鋼網·補足10％CS或加10％FBS，製成細胞懸液。

4．細胞計數與(yu) 分裝取上述獲得的單細胞懸液少量，進行1：5稀釋後計數，然後調細胞濃度為(wei) O．5×106／ml，分裝於(yu) 培養(yang) 瓶內(nei) 。待細胞培養(yang) 有一定經驗後，可省略細胞計數步驟，而憑經驗估計細胞濃度，如一隻10日齡雞胚製成lOml細胞懸液時細胞數約為(wei) 4×106／ml，也可視其懸液的透明度來估計。

三、結果觀察

    將上述培養(yang) 物置37℃孵箱內(nei) 培養(yang) ，每天對培養(yang) 接種的細胞進行常規檢查，觀察的主要內(nei) 容有：細胞生長狀態、汙染與(yu) 否、pH等。如培養(yang) 液為(wei) 橘紅色，一般說明細胞生長良好。一般於(yu) 24h後可見到許多細胞貼壁，由圓形懸浮狀態的細胞延展成短梭形。2～3d後長成單層細胞，換維持液後即可用於(yu) 實驗，或經傳(chuan) 代後再長成單層細胞時使用。

四、注意事項

    消化時溫度不能高於(yu) 37℃，消化時間不宜過強。如果胰酶消化過強，則易被損傷(shang) 不宜生存。