(一)培養(yang) 基的製備方法

1．選定培養(yang) 基配方，製備培養(yang) 基記錄

    首先查閱資料，確定培養(yang) 基的配方，同一種的配方在不同著作中常會(hui) 有某些差別。因此，除所用的是標準方法，應嚴(yan) 格按其規定進行配製外，一般均應盡量搜集有關(guan) 資料，加以比較核對，再依據自己的使用目的，加以選用，記錄其來源。檢查配製培養(yang) 基所用的材料、試劑是否齊全，數量及質量(純度、期限)是否合格；同時還要準備好配製培養(yang) 基所用的各種設備和裝置。微生物檢驗實驗室需要經常配製不同種類的培養(yang) 基．有必要建立培養(yang) 基的製備記錄。記錄主要包括培養(yang) 基名稱、配方、試劑來源及批號、培養(yang) 基zui終pH值、滅菌條件、製備的日期、製備者等內(nei) 容，原始記錄保存備查．還應複製一份記錄隨製好的培養(yang) 基一同存放．以防發生混亂(luan) 。

2．培養(yang) 基成分的稱取

    配置培養(yang) 基所用的化學藥品均應該是化學純的，一般可用1/100的天平稱量．根據培養(yang) 基的配方計算出各成分用量．進行準確稱量。培養(yang) 基的各種成分必須注意防止錯亂(luan) ，一次完成，不要中斷。可將配方置於(yu) 旁側(ce) ，每稱完一種成分即在配方處做出記號，並將所需稱取的藥品一次取齊，置於(yu) 左側(ce) ，每種稱取完畢後，即移放於(yu) 右側(ce) 。*稱取完畢後，還應進行一次檢查。稱量好的藥品放人適當大小的燒杯中．瓊脂不要加入。蛋白腖極易吸潮，故稱量時要迅速。加入的一般培養(yang) 基配方用1000mI。培養(yang) 基中所含各種成分的質量(g)來表示。配製時應先估計實際需要培養(yang) 基的用量．然後按比例計算各種藥品的用量。

3．加熱溶化培養(yang) 基

    用量簡取一定量(占總量的1／2～2／3)的蒸餾水，倒人盛有藥品的容器(搪瓷缸、不鏽鋼鍋或燒杯)中，不得使用鐵鍋、銅鍋，以防有微量銅或者鐵混入培養(yang) 基中+使細菌不能生長。把容器在放有石棉網的電爐上小火加熱．並用玻棒攪拌．以防液體(ti) 溢出或者焦化。如果發生焦化現象則需要重新配置培養(yang) 基。待各種藥品*溶解後，停止加熱，補足水分。如果配方中有澱粉，則先將澱粉用少量冷水調成糊狀，並在火上加熱攪拌．然後加足水分及其他原料，待*溶化後，補足水分；

    溶化瓊脂時如需製成固體(ti) ，應在已配好的液體(ti) 培養(yang) 基呈沸騰狀態下加入1．5％～2．0％瓊脂條(用剪刀切碎)或瓊脂粉，並用玻棒不斷攪拌，同時注意控製火力．以免糊底燒焦及防止溢出。繼續加熱至瓊脂全部溶化．zui後補足因蒸發而失去的水分。或者將瓊脂單獨溶化30min，用一部分水溶化其他成分，然後將兩(liang) 溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發而丟(diu) 失的水分，zui後必須補足。在製備用三角瓶盛固體(ti) 培養(yang) 基時，一般也可先將一定量的液體(ti) 培養(yang) 基分裝於(yu) 三角瓶中，然後按1．5％～2．0％的量將瓊脂直接加入各三角瓶中．不必加熱溶化；而是滅菌和加熱溶化同步進行．以節省時間。

4．調節pH值

    因培養(yang) 基在加熱消毒過程中，pH值會(hui) 有所改變．培養(yang) 基各成分充分溶解後，應進行pH值的初步調整。例如．牛肉浸液約可降低pH值0．2．而腸浸液pH值卻會(hui) 有顯著的升高。因此．對這個(ge) 步驟，操作者應隨時注意探索經驗，掌握培養(yang) 基的zui終pH值，保證培養(yang) 基的質量。

    取適當範圍的精密pH值試紙一小條，用玻璃棒蘸取少許待測培養(yang) 基滴在試紙上，與(yu) 比色板對照顏色，測定所配培養(yang) 基的pH值。如培養(yang) 基偏酸或偏堿時一可用1mol／LNaOH溶液或1mol／L HCl溶液逐滴緩慢加入，邊加邊攪拌，並隨時用pH試紙檢測·直至達到所需pH值範圍為(wei) 止。pH值的調節通常放在加瓊脂之前，pH值調整後，還應將培養(yang) 基煮沸數分鍾，以利於(yu) 培養(yang) 基沉澱物的析出．另外調節pH值時應注意以下幾點問題：

①培養(yang) 基必須冷卻至室溫時才可調節pH值。

②加酸或堿溶液時．要緩慢少量加入，並多加攪拌，防止局部過酸或過堿而破壞培養(yang) 基中營養(yang) 成分。

③pH值一次調成功，否則回調會(hui) 影響培養(yang) 基內(nei) 各離子的濃度。

④配製pH值低的瓊脂培養(yang) 基時，若預先調好pH值並在高壓蒸汽下滅菌．則瓊脂因水解不能凝固。因此．應將培養(yang) 基的成分和瓊脂分開滅菌後再混合，或在中性pH值條件下滅菌．再調整pH值。

⑤有些微生物要求pH值較．可用酸度計調節的pH值。