[實驗原理]

    大腸杆菌是含有長約3000Kb的環狀染色體(ti) 的棒狀細菌，它能在僅(jin) 含碳水化合物（如葡萄糖，提供碳源和能量）和提供氮、磷、微量元素的無機鹽的極限上快速生長。如果用含氨基酸、核苷酸前體(ti) 、維生素以及其它一些細菌不能合成的代謝成分的豐(feng) 富培養(yang) 基來培養(yang) ，那麽(me) 大腸杆菌會(hui) 生長的更快。大多數應用於(yu) DNA重組技術的細菌是大腸杆菌K-12株的衍生菌株。

    當大腸杆菌在液體(ti) 培養(yang) 基中培養(yang) 時，其開始裂殖前，先進入一個(ge) 生長滯後期。在豐(feng) 富培養(yang) 基中，它能在20-30min內(nei) 複製一代，這種指數生長相稱之為(wei) 對數期。zui後，當培養(yang) 基中的營養(yang) 成分和氧耗盡或當培養(yang) 基中廢物的含量達到抑製細菌的快速生長的濃度時，菌體(ti) 密度就達到一個(ge) 比較恒定的值。在通常的實驗室培養(yang) 中，在這一時期的細胞密度一般為(wei) 1*109—2*109ml，細胞停止迅速分裂。這就是細菌生長的飽和期，而所謂的新鮮飽和即指當培養(yang) 液中細胞密度剛到達這一水平。

    培養(yang) 特征是指微生物在培養(yang) 基上所表現的群體(ti) 形態和生長情況。細菌培養(yang) 特征的常規檢驗包括平麵上的菌落特征，液體(ti) 培養(yang) 時的生長特征以及斜麵培養(yang) 上的菌苔特征。菌落是個(ge) 體(ti) 微生物在固體(ti) 培養(yang) 基上生長繁殖成的肉眼可見的群落。在一定的培養(yang) 條件下，不同的細菌形成的菌落形狀是不一樣的。

[儀(yi) 器、材料與(yu) 試劑]

(一) 儀(yi) 器和材料

    超淨工作台酒精燈 無菌培養(yang) 皿及試管 接種環 無菌牙簽 塗布棒DH5α菌株

(二) 試劑

    LB液體(ti) ：每升含10g胰蛋白腖、5g酵母提取物、5g NaCL、1mL 1M NaOH

    LB固體(ti) 培養(yang) 基：每升含10g胰蛋白腖、5g酵母提取物、5g NaCL、1mL 1M NaOH、15g瓊脂糖

[實驗步驟]

（一） 在固體(ti) 培養(yang) 基中培養(yang)

    將已熔化的LB固體(ti) 培養(yang) 基冷涼到50℃左右（即熱而不燙手），按無菌操作倒入無菌培養(yang) 皿內(nei) ，冷卻凝固成平板，將塗布棒的三角部分浸沒於(yu) 酒精中，取出後再通過燈焰，點燃其上的乙醇，待塗布棒上的火焰熄滅後，將其觸碰無菌瓊脂平板的表麵使其冷卻。然後，取少許菌液（100uL）滴在平板上，用塗布棒作圓周運動將菌液塗布均勻，待平板幹後於(yu) 37℃倒置培養(yang) 。待菌落長出後，觀察菌落特征

（二） 在液體(ti) 培養(yang) 基中培養(yang)

    取5mL液體(ti) 加入一支無菌試管中，用無菌牙簽挑一個(ge) 單菌落浸沒於(yu) 培養(yang) 液中並輕輕振動，使待接種的細菌分散在培養(yang) 液中，蓋好試管，在搖床上以60r/min於(yu) 37℃培養(yang) 至飽和（約6h），觀察液體(ti) 培養(yang) 物是否混濁。利用分光光度計監測，按每0.1 OD值大約相當於(yu) 108細胞/mL計算細菌濃度。