革蘭(lan) 氏染色液染色法是細菌學中zui廣泛使用的一種鑒別染色法。1884 年 由丹麥醫師 Gram 創立。方法是先將細菌用結晶紫染色，加媒染劑（增加染料和的親(qin) 和力）後，用脫色劑（酒精或丙酮）脫色，再用複染劑染色。如果細菌 不被脫色而保存原染液顏色者為(wei) 革蘭(lan) 陽性菌(G＋)；如被脫色，而染上複染液的顏 色者為(wei) 革蘭(lan) 陰性菌(G-)。此染色法可將所有具有細胞壁的細菌分為(wei) 兩(liang) 大類：革蘭(lan) 陽性菌和革蘭(lan) 陰性菌。
 
    單染色法：隻能觀察微生物的大小、形狀、和細胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構造等。

    複染色法：用兩(liang) 種或兩(liang) 種以上染色液進行染色，有協助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭(lan) 氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。
 
    染色原理： 現在認為(wei) 細菌對革蘭(lan) 染色的不同反應主要是革蘭(lan) 陽性菌和陰性菌 的細胞壁結構與(yu) 化學組成不同。革蘭(lan) 陽性菌的細胞壁較厚，肽聚糖含量多，且交 聯度大，脂類含量少，經95％乙醇脫色時，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，與(yu) 結合的結晶紫與(yu) 碘的複合物不易被脫掉，因此細胞仍保留初染時的顏色。而革蘭(lan) 陰性菌的細胞壁較薄，含有較多的類脂質，而肽聚糖的含量較少，乙醇脫 色時溶解外層類脂質，增加了細胞壁的通透性，使初染的結晶紫和碘的複合物易 於(yu) 滲出，結果細胞被脫色，經複染後，又染上複染的顏色。
 
1. 革蘭(lan) 氏染色 

（1）塗片

（2）初染：在做好的塗麵上滴加草酸銨結晶紫染液，染1分鍾，傾(qing) 去染液，流水衝(chong) 洗至無紫色。

（3）媒染：先用新配的路哥氏碘液衝(chong) 去殘水，而後用其覆蓋塗麵1分鍾，後水洗。

（4）脫色：除去殘水後，滴加95%酒精進行脫色約15－20秒，後立即用流水衝(chong) 洗。

（5）複染：滴加番紅染色液，染3－5分鍾，水洗後用吸水紙吸幹。

（6）鏡檢：觀察染色結果並繪圖。

2. 染色過程：塗片（大腸杆菌和金黃色葡萄球菌）→幹燥→固定→初染（結晶 染色過程： 紫染色 1min）→媒染（碘 1min）→水洗→95%乙醇脫色（1min）→複染（番紅花 紅染色 1min）→幹燥→鏡檢（油鏡）

3. 油鏡的使用與(yu) 保養(yang)

（1）在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然後慢慢轉動油鏡，在轉 換油鏡時，從(cong) 側(ce) 麵水平注視鏡頭與(yu) 玻片的距離，使鏡頭浸入油中而 又不以壓破載玻片為(wei) 宜。 

（2）用雙眼觀察目鏡，並慢慢轉動粗調節器至出現模糊物象，然後用細調節器至物象清晰為(wei) 止。 

（3）如果不出現物象或者目標不理想要重找。

（4）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙沾少許乙醇將鏡頭上和標本上的香柏油 擦去，然後再用幹擦鏡紙擦幹淨。