Annexin V是檢測細胞凋亡的靈敏指標之一。在細胞發生凋亡時,細胞膜上的磷脂酰絲(si) 氨酸(PS)由質膜內(nei) 側(ce) 翻向外側(ce) ,而Annexin V與(yu) PS有高度的親(qin) 和力,可以與(yu) 暴露在細胞外側(ce) 的PS結合。在細胞發生凋亡時,PS的外翻要早於(yu) 細胞核的改變,因此與(yu) DNA碎片檢測比較,使用Annexin V可以更早的檢測到細胞的凋亡。但是細胞死亡時也會(hui) 發生PS的外翻,所以Annexin V常與(yu) 鑒定細胞死活的核酸染料PI結合使用來區分凋亡細胞(Annexin V+/PI-)和死亡細胞(Annexin V+/PI+)。
操作步驟:
1. 用不含EDTA的0.25%胰酶消化各組細胞,收集後1000rpm離心5min,PBS重懸。
2. PBS將細胞潤洗2次,1500rpm離心5min。
3. 各組樣品分別依次加入500μL Binding Buffer,5μL Annexin V-FITC,5μL PI,混勻,室溫避光反應5~15min。
4. 流式細胞儀(yi) 上機檢測,CELLQuest軟件獲取和分析實驗數據。