1．培養(yang) ：取處於(yu) 指數生長期、用較大瓶皿培養(yang) 的、80％～90％匯合單層培養(yang) 細胞。

 2．加秋水仙素：使用zui終濃度為(wei) 0.02～0.8微克/毫升營養(yang) 液，溫箱繼續培養(yang) 6～10小時；或用低溫封 閉法：把培養(yang) 細胞置於(yu) 4℃條件下6～12小時後，再於(yu) 37℃溫箱繼續培養(yang) 6～10小時處理（加秋水仙素）。

 3．采集分裂細胞：可利用分裂中期細胞體(ti) 變圓與(yu) 底物附著不牢特點，此時手持培養(yang) 瓶，左右反複橫向 水平搖動，令培養(yang) 液在培養(yang) 細胞表麵反複衝(chong) 刷。應用此法可使90％的中期分裂細胞從(cong) 瓶壁脫落，注意勿用力過猛，以防多量非分裂細胞脫落影響觀察。

 4．離心：收集培養(yang) 液，1000轉/分鍾離心5～10分鍾。

 5．低滲處理：吸除上清液、加入預溫至37℃的0.075M KCl溶液，在溫箱中靜置20～30分鍾。

 6．預固定：向懸液中加新鮮1：3醋酸、甲醇固定液1ml，用吸管吹打調勻，此措施能起到先使表麵輕微固定，可防止固定後細胞粘連成塊。

 7．固定：離心，同4，吸除上清液，加新鮮固定劑5～10ml；加固定劑時要用一手微斜持離心管，另手用吸管吸取固定劑，把固定劑逐滴滴在離心管壁上，使之慢慢流入離心管中，然後輕輕吹打均勻，置15～20分鍾。

 8．重複7，末次離心後，小心吸除大部分上清，據懸液中細胞密度大小，餘(yu) 下固定液0.5～1ml。

 9．製片：用滴片法製片，按如下步驟：*洗淨載物片，勿留任何油脂，置冰箱中儲(chu) 備備用。滴片前現從(cong) 冰箱中取出冷載物片1片，在載物片表麵出現細微水氣時，立即向片的一側(ce) 滴2～3滴細胞懸液，滴片時的距離能保持半米高度才好。滴片後置室溫中令其自然幹燥，或用吹風機熱風吹幹亦可。如此製備好的標本可置盒中備用或立即進行染色觀察。

 10.染色和封片：一般常用Giemsa染色：取幹液Giemsa 1份加pH6.8磷酸緩衝(chong) 液9份混合，染色10分鍾後，水洗、晾幹、可直接觀察。如標本需要保存或做長時間觀察，可過二甲苯兩(liang) 次後，用中性樹膠封片後，再過二甲苯，然後封片亦可。