細胞複蘇的具體(ti) 操作:
一. 實驗前準備:
1.將水浴鍋預熱至37℃
2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超淨工作台台麵。
3.在超淨工作台中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yang) 瓶等等。
二.取出凍存管:
1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
2.從(cong) 液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。
三.迅速解凍:
1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,並要不斷的搖動,使管中的液體(ti) 迅速融化。
2.約1-2min後凍存管內(nei) 液體(ti) *溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超淨台內(nei) 。
四.平衡離心:用架盤天平平衡後,放入離心機中3000r/min 離心3min
五.製備細胞懸液:
1.吸棄上清液。
2.向離心管內(nei) 加入10ml培養(yang) 液,吹打製成細胞懸液。
六.細胞計數:細胞濃度以5×105/ml為(wei) 宜。
七.培養(yang) 細胞將複合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養(yang) 瓶內(nei) ,將培養(yang) 瓶放入37℃和5%CO2的培養(yang) 箱內(nei) 2-4小時(或者24-48小時)後換液繼續培養(yang) 培養(yang) ,換液的時間由細胞情況而定