細胞製備流程及轉化方法
1. 轉移0.2-1ml培養(yang) 物至裝有500ml LB(或其他營養(yang) 豐(feng) 富的培養(yang) 基)的1-2升搖瓶

2. 37°C下劇烈振蕩培養(yang) 2-6小時

3. 定時監控OD600值(培養(yang) 1小時後每半小時測定一次)

4。 當OD600值達到0.5-1.0時，從(cong) 搖床中取出搖瓶，置於(yu) 冰上冷卻至少15分鍾(需要的話這種方式可以存放培養(yang) 液數小時)

5. 細胞在4°C 5000g下離心15分鍾，棄上清液(如需要，沉澱可在4°C的10%甘油中保存一兩(liang) 天)

6. 用滅菌的冰水重懸浮細胞。先用渦旋儀(yi) 或吸液管重懸浮細胞於(yu) 少量體(ti) 積中(幾毫升)，然後加水稀釋至離心管的2/3體(ti) 積。

7. 照上麵步驟重複離心，小心棄去上清液

8. 照上麵步驟用滅菌的冰水重懸浮細胞

9. 離心，棄上清液

10. 用20ml滅菌的、冰冷後的10%甘油重懸浮細胞

11. 照上麵步驟離心，小心棄去上清液(沉澱可能會(hui) 很鬆散)

12. 用10%甘油重懸浮細胞至zui終體(ti) 積為(wei) 2-3ml

13. 將細胞按150μl等份裝入微量離心管，於(yu) -80°C保存