影響洗滌效果的主要參數是洗滌循環的量。當然,洗滌次數越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會(hui) 降低信號強度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體(ti) 或抗原孵育後重複洗滌三次。不過,ELISA板的商會(hui) 對洗滌次數提出建議。一般而言,商包被平板需要的洗滌次數比用戶包被的平板要少。對於(yu) 用戶包被的ELISA板,必須優(you) 化洗滌次數。
控製洗滌量和洗滌次數的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說,96孔板的每個(ge) 孔能容納330至460 µl。不過,有些自動化洗板機可設置程序,分配遠遠超出這個(ge) 量的洗滌液,比如1 ml。它是如何做到的呢?其實很簡單,就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說,隨著分液器分配更多的液體(ti) ,抽吸器也將液體(ti) 吸出。這種技術能增加洗滌量,但不會(hui) 溢出到其他孔中。
抽吸
另外,還有一些參數會(hui) 影響洗滌步驟的效果。這些參數包括吸液高度和吸入位置,這兩(liang) 者都能調整,以降低背景(殘留量)和差異。
殘留液體(ti) 中包含未結合的抗原或抗體(ti) ,它們(men) 會(hui) 增加背景信號。殘留量越小,殘留液體(ti) 越少,轉移到下一步的幹擾液體(ti) 也就越少。
吸液高度會(hui) 明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與(yu) 反應孔底部的距離稍大,那就會(hui) 讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應孔底部,那麽(me) 也會(hui) 使吸液效率降低,殘留量增加。
目前的洗板機一般使用兩(liang) 種類型的洗頭:剛性和浮動的。浮動洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動,而剛性洗頭則固定在適當的位置。使用剛性洗頭的洗滌操作在優(you) 化起來更為(wei) 複雜,因為(wei) 你需要非常仔細地調整吸液高度。如果你們(men) 實驗室使用幾種不同的板,那可能會(hui) 很耗時。在使用浮動洗頭時,吸頭會(hui) 降到反應孔的底部。調整高度就不是很重要,因此洗頭會(hui) 下降到底部。
抽吸的位置也對殘留量有著重要影響;如果每個(ge) 孔隻使用一個(ge) 抽吸點(這很常見,因為(wei) 更快),那麽(me) 抽吸的位置需要優(you) 化。*的位置取決(jue) 於(yu) 洗頭的性狀,但它幾乎不在反應孔的中間,即使這是所有洗頭zui常見的默認位置。一般來說,*位置在孔中間與(yu) 孔壁之間的某處。
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