封閉液的作用是讓不相關(guan) 的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產(chan) 生信號的抗體(ti) 非特異結合的機會(hui) 。您當然也希望抗體(ti) 隻與(yu) 目的蛋白結合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那麽(me) 您可以嚐試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾，那麽(me) 也許您該花些時間來優(you) 化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩(liang) 種類型的封閉液：蛋白和非離子型去汙劑。您使用的類型須取決(jue) 於(yu) 多個(ge) 因素，包括微孔板的表麵試劑、吸附的抗原、您的抗體(ti) 和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與(yu) 抗原、抗體(ti) 或檢測試劑發生相互作用。
zui常用的非離子型去汙劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩定，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。但它們(men) 隻在存在時起作用，因為(wei) 很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度（正常濃度為(wei) 0.01-0.1%），它會(hui) 降低特異結合，產(chan) 生假陰性。另一個(ge) 選擇是使用蛋白和非離子型去汙劑這兩(liang) 種封閉液，後者可協助洗滌過程中的封閉。
蛋白封閉液則有所不同，是*的。它們(men) 與(yu) 開放位點結合並封閉，同時穩定與(yu) 微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nei) 在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在於(yu) 能與(yu) Protein A和IgG抗體(ti) 相互作用。解決(jue) 這個(ge) 問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。
抗體(ti) 濃度須優(you) 化
我們(men) 通常會(hui) follow師兄師姐留下來的操作步驟，但是如果試劑稍有不同，則可能需要優(you) 化抗體(ti) 的量。記住，非特異的抗體(ti) 結合會(hui) 增加背景。為(wei) 了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。
檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見：切勿使用過多的。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會(hui) 導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(you) 化一下何時應加入終止液。
100060-200302    UV法含量測定    50mg    酞丁安
100061-200607    含量測定     100mg     維生素D3
10062－ 200608     含量測定      200mg     維生素E
100063-199503    含量測定     100mg     戊酸雌二醇
100065-200505    含量測定    100mg    鹽酸胺碘酮
100066-200807    含量測定    100mg    鹽酸苯海拉明
100067-200602    含量測定    100mg    鹽酸苯海索
100068-199702    含量測定    50mg    鹽酸多沙普侖(lun)