ELISA的基本原理
    酶聯免疫吸附試驗（ELISA）顧名思義(yi) 就是以酶作為(wei) 標記指示物、以抗原抗體(ti) 免疫反應為(wei)
基礎的固相吸附測定方法。因此，一個(ge) ELISA測定試劑，其有機組成部分包括三個(ge) 方麵，即固相支持物及包被的抗原或抗體(ti) 、酶標記的抗體(ti) 或抗原和酶反應底物等。抗原或抗體(ti) 的固相化並不影響其免疫結合活性，酶標記的抗體(ti) 或抗原亦是如此，並且標記酶的活性不因標記過程而喪(sang) 失。整個(ge) 測定中，抗原抗體(ti) 結合反應在固相支持物上進行，反應結果的判斷以酶與(yu) 其底物作用後的顯色或產(chan) 生熒光或發光反應為(wei) 準則，顯色或產(chan) 生熒光或發光的強度與(yu) 臨(lin) 床標本中待測物的濃度成正比或反比關(guan) 係。目前國內(nei) 的xl18luck新利均以酶的顯色反應來完成測定。

 固相上抗原抗體(ti) 相互作用的免疫化學

   固相上抗原抗體(ti) 結合反應所需要的時間  通常，固相免疫測定如ELISA中抗原抗體(ti) 結合達到平衡所需要的時間，要大於(yu) 液相免疫測定，並隨液體(ti) 所占體(ti) 積與(yu) 界麵抗體(ti) 或抗原受體(ti) 所占體(ti) 積比的增加而增加。當在微孑L板孔內(nei) 進行免疫測定時，界麵反應動力學顯示其對擴散作用有很強的依賴性，擴散性越強則反應所需時間越短，結合越充分。這一點可通過旋轉振蕩來達到，微孔的旋轉振蕩可促使液體(ti) 進入到可與(yu) 抗體(ti) 或抗原包被界麵接觸的較小的區域內(nei) 。也可在微孔中放一個(ge) 惰性的塞子以使反應液體(ti) 成為(wei) 一個(ge) 小體(ti) 積，或使用一個(ge) 具有大表麵的多孔的基質如硝酸纖維素，或使用微顆粒來做到這一點。微顆粒小於(yu) lum時，在測定時即成膠體(ti) 懸液，而當顆粒或珠較大時，則會(hui) 在沒有振蕩時，由於(yu) 重力的作用而分開。所有上述方法均是通過減少液體(ti) 所占體(ti) 積與(yu) 界麵抗體(ti) 或抗原受體(ti) 所占體(ti) 積比，從(cong) 而減少固相免疫測定的擴散依賴性。

反應體(ti) 積  此處的反應體(ti) 積並非是微孔中的液體(ti) 體(ti) 積，而是固相免疫測定中與(yu) 固相包被的抗體(ti) 或抗原有接觸的部分，這部分體(ti) 積到底有多少，很難測定，但比反應管中總液體(ti) 體(ti) 積要少得多。固相抗原抗體(ti) 反應發生於(yu) 液體(ti) —固相界麵，可能處於(yu) 一級結合鍵的引力距離內(nei) ，小於(yu) 10nm。液相中待測抗原或抗體(ti) 要進入到這個(ge) 結合界麵，需要擴散或質量轉移。微顆粒的反應表麵區域較微孑L要大得多，因而處於(yu) 抗原抗體(ti) 結合界麵的體(ti) 積占總反應體(ti) 積的比例亦高得多。因此，結合反應的效率更高。這也是全自動化免疫測定分析儀(yi) 均采用微顆粒固相的重要原因之一。可參與(yu) 結合反應的抗體(ti) 或抗原的濃度取決(jue) 於(yu) 可參與(yu) 結合的反應體(ti) 積，這無法計算。這一點使得使用通常的質量作用定律圖形的Keq的計算變得複雜化，因此，固相抗原抗體(ti) 反應的KeQ值與(yu) 液相抗原抗體(ti) 反應的Keq值沒有可比性。

微孔內(nei) 特異抗體(ti) 的免疫測定  使用吸附的複雜抗原進行微孔內(nei) 特異抗體(ti) 的免疫測定，
與(yu) 液相測定相比，有明顯的親(qin) 和力依賴性，固相受體(ti) —配體(ti) 相互作用的穩定性似乎與(yu) 微孔內(nei) 特異抗體(ti) 的免疫測定親(qin) 和力依賴性和極低比例的所捕獲的總抗體(ti) 相矛盾