實驗原理
本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中大鼠CC 趨化因子受體(ti) 7（CCR-7）水平。用純化
的大鼠CC 趨化因子受體(ti) 7（CCR-7）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中
依次加入CC 趨化因子受體(ti) 7（CCR-7），再與(yu) HRP 標記的CC 趨化因子受體(ti) 7（CCR-7）抗體(ti) 結
合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶
的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CC 趨化
因子受體(ti) 7（CCR-7）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲
線計算樣品中大鼠CC 趨化因子受體(ti) 7（CCR-7）濃度。
大鼠CC趨化因子受體(ti) 7（CCR-7）Elisa試劑盒使用說明書(shu) 試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品（32pg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書(shu) 1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個(ge)
標本要求
1．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
16pg/ml 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
8pg/ml 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
4pg/ml 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2pg/ml 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
1pg/ml 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為(wei) 5 倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30 分鍾。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒後棄去，如此
重複5 次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液後15 分鍾以內(nei) 進行。
操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD 值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與(yu) OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即為(wei) 樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控製在5 分鍾內(nei) ，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大於(yu) 標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計
算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與(yu) 英文說明書(shu) 有異，以英文說明書(shu) 為(wei) 準。
大鼠CC趨化因子受體(ti) 7（CCR-7）Elisa試劑盒使用說明書(shu) 保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個(ge) 月