大腸杆菌宿主殘留蛋白（E.coli P）酶聯免疫分析
試劑盒使用說明書(shu)
本試劑盒僅(jin) 供研究使用。
檢測範圍： 96T
0.6ng/L - 16ng/L
使用目的：
本試劑盒用於(yu) 測定血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中大腸杆菌宿主殘留蛋白（E.coli P）含量。 實驗原理
本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中大腸杆菌宿主殘留蛋白（E.coli P）水平。用純化的 大腸杆菌宿主殘留蛋白（E.coli P）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次 加入大腸杆菌宿主殘留蛋白（E.coli P），再與(yu) HRP 標記的大腸杆菌宿主殘留蛋白（E.coli P）抗 體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大腸杆 菌宿主殘留蛋白（E.coli P）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過 標準曲線計算樣品中大腸杆菌宿主殘留蛋白（E.coli P）濃度。
試劑盒組成
| 1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
| 2 | 酶標試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標準品（32ng/L） | 0.5ml×1 瓶 |
| 3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書(shu) | 1 份 |
| 5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
| 6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個(ge) |
標本要求
1．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。大腸杆菌宿主殘留蛋白（E.coli P）
| 16ng/L | 5 號標準品 | 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
| 8ng/L | 4 號標準品 | 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
| 4ng/L | 3 號標準品 | 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
| 2ng/L | 2 號標準品 | 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
| 1ng/L | 1 號標準品 | 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然後再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為(wei) 5 倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此 重複 5 次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鍾.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液後 15 分鍾以內(nei) 進行。
計算
以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD 值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與(yu) OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數， 即為(wei) 樣品的實際濃度。 大腸杆菌宿主殘留蛋白（E.coli P）
注意事項
1．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控製在 5 分鍾內(nei) ，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，zui好做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值 大於(yu) 標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計 算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與(yu) 英文說明書(shu) 有異，以英文說明書(shu) 為(wei) 準。 保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個(ge) 月 大腸杆菌宿主殘留蛋白（E.coli P）
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