基因已經整合到銀耳基因組中；RT-PCR結果顯示，在銀耳細胞中可以動物xl18luck新利檢測到人胰島素基因的mRNA；Southern雜交結果表明人胰島素基因以單拷貝的形式整合到銀耳基因組DNA中。本試驗通過設置農(nong) 杆菌與(yu) 銀耳芽孢不同共培養(yang) 時間、誘導劑乙酰丁香酮的濃度、銀耳芽孢及農(nong) 杆菌xl18luck新利濃度等因素對轉化效率影響，結果在乙酰丁香酮濃度為(wei) 500μmol/mL、銀耳芽孢濃度為(wei) 108個(ge) /mL、農(nong) 杆菌OD=0.5及共培養(yang) 時間為(wei) 2d時，轉化效率zui高，為(wei) 310個(ge) 轉化子/108個(ge) 銀耳芽孢。轉化子轉接5代後對潮黴素仍有抗性，說明外源基因在銀耳芽孢中能夠不亂(luan) 遺傳(chuan) 。在實驗室已初步建立的農(nong) 杆菌EHA105介導銀耳轉基因方法的基礎上，xl18luck新利以銀菌株Tr21-01為(wei) 出發菌株，通過凍融法將攜帶有潮黴素磷酸轉移酶（Hph）基由於(yu) 遺傳(chuan) 標記及人胰島動物xl18luck新利素基因（BAC）為(wei) 目的基因的質粒pBHg-BCA導入根癌農(nong) 杆菌GV3101，LBA4404和AGL-1中，並進一步介導轉究。實驗結L-1具有較高的轉化率；GV3101轉化率較低，且假陽性較高；LBA4404無抗性菌落長出。此結果表明不同的農(nong) 杆菌侵染銀耳芽孢能力具有差異性，且對受體(ti) 侵染具有一定的特異性。本實驗以農(nong) 杆菌EHA105為(wei) 參照菌株，xl18luck新利對農(nong) 杆菌AGL-1介導轉化銀耳進行研究。基於(yu) 農(nong) 杆菌介導轉基因受諸多因素的影響，本實驗從(cong) 農(nong) 杆菌與(yu) 銀耳芽孢共培養(yang) 時間、銀耳芽孢濃度、農(nong) 杆菌濃度、誘導劑乙酰丁香酮（AS）的濃度、轉率等方麵進行優(you) 化。其轉化前提優(you) 化結果為(wei) ：AGL-1菌液OD值為(wei) 0.4～0.5，AS誘導培養(yang) 濃度為(wei) 250μg/mL、共培養(yang) 濃度為(wei) 150μ耳芽孢濃度為(wei) 10~8/mL，共培養(yang) 72h轉化率zui高，可達500個(ge) /10~8，且陽性菌落為(wei) 89%；EHA105菌液OD值為(wei) 0.4～0.5。xl18luck新利