酶標記抗體(ti) 注意事項

在xl18luck新利免疫酶技術中，首先要確定的變異因素就是酶標記物的工作濃度。因為(wei) 酶標記物濃度的很小變化，便可導致試驗結果產(chan) 生很大的波動。另外，由於(yu) 濃度過高，可使非特異性反應增加，而濃度過低又可影響測定的敏感性。因此，正式試驗前必須準確滴定其工作濃度。

將抗原(或抗體(ti) )物理吸附於(yu) 固相載體(ti) 上，然後將經過一係列稀釋的酶標抗體(ti) (或抗Ig抗體(ti) )與(yu) 吸附在載體(ti) 上的抗原(或抗體(ti) )起反應，以酶與(yu) 底物的顯色反應程度來確定酶標記抗體(ti) 的效價(jia) ，或稱工作濃度。

其步驟為(wei) ：先將抗原(或抗體(ti) )用0.05M PH9.6包被緩衝(chong) 液稀釋為(wei) 10μg/ml左右，於(yu) 聚苯乙烯板孔內(nei) 加0.1ml，4℃隔夜，次日以洗滌緩衝(chong) 液洗滌3次。酶標記抗體(ti) 用1%BSA-PBS液依次稀釋成1∶100，1∶200，1∶400，1∶800，1∶1600……(根據據抗體(ti) 的滴度而定)，分別加入反應孔中，每個(ge) 稀釋度二孔，每孔0.1ml，37℃孵育1小時後洗滌。然後加底物液，每孔0.1ml，37℃10～30分鍾。以2M H2SO4 0.05ml終止反應。

結果判定主要以xl18luck新利比色儀(yi) 讀取各孔OD值。並以OD為(wei) 縱座標，結合物濃度為(wei) 橫座標，繪製滴定曲線。由曲線上查得OD值為(wei) 1.0左右，且曲線斜率zui大時的酶標抗體(ti) 稀釋度，即為(wei) 該標記物的工作濃度。

有關(guan) 試驗的試劑及器材均見xl18luck新利部分。

C要說明的是，本法為(wei) xl18luck新利直接法，所測的工作濃度與(yu) 在實際應用中的zui適濃度可相差幾個(ge) 滴度。這就要求在建立xl18luck新利實驗係統中，因此基礎上還應進一步確定實際工作濃度(可采用方陣法)，以達到zui適的實驗條件。

注意事項

1. 在具備高質量HRP的條件下，所要標記的抗體(ti) 也要活性高,效價(jia) 高(zui低1∶16),純度高，親(qin) 和力好，這是保證標記物效價(jia) 高，免疫活性好的首要條件。"

2. 所使用xl18luck新利的PH和濃度及用量必須嚴(yan) 格掌握。所用試劑，(或必需)新鮮配製。如在戊二醛標記法中所用戊二醛應為(wei) 新鮮純品，因戊二醛儲(chu) 存過久可形成縮和體(ti) (雜質)。否則，影響標記效果。

3. 室溫攪拌時須避光，室內(nei) 溫度一般在25℃為(wei) 宜。標記物每次透析前，須認真檢查，防止漏液。

4. 濃的標記物相當穩定，常加入30～40%甘油於(yu) -10℃下保存。4℃可保存1～2年，但稀釋成1∶10，隻能保存數周。xl18luck新利已配製的使用液應在12小時內(nei) 用完。切忌反複凍融。