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細胞毒活性測定法
更新時間:2016-12-16   點擊次數:1329次

 毒活性測定法
很多細胞因子針對轉化的細胞及病毒感染的細胞具有溶細胞或抑製細胞生長的活性。常用的檢測細胞增殖的方法有3H-TdR摻人法、比色法、染色法和直接計數法等。檢測細胞因子促生長活性或抑製生長活性是將不同稀釋度的待測樣品或細胞因子標準品與(yu) 培養(yang) 的細胞株共同培養(yang) 一定時間,然後檢測增殖的細胞數。此外,測定代謝產(chan) 物熒光強度的方法也可檢測增殖數,如ATP法和cAMP法。檢測細胞因子溶細胞八田胞毒活性或抑製生長活性是將不同稀釋度的待測樣品或細胞因子標準品與(yu) 培養(yang) 的細胞株共同培養(yang) 一定時間,然後檢測存活的靶細胞數,並與(yu) 對照比較求得溶細胞或抑製細胞生長的百分率,或以OD值對樣品稀釋度作圖,繪製標準品的劑量反應曲線,從(cong) 曲線上求得相應的待測樣品的含量。生物學活性檢測法所用的靶細胞可直接從(cong) 組織中分離,如骨髓細胞的集落形成試驗和胸腺細胞(脾細胞)的增殖試驗,或用體(ti) 外培養(yang) 的依賴細胞因子才能生長的細胞因子依賴株及對細胞因子殺傷(shang) 敏感的細胞作為(wei) 靶細胞。細胞因子還能誘導靶細胞表達某些表麵分子或分泌一些蛋白質,可以用熒光素標記抗體(ti) 檢測表達相應分子的細胞數,或用特定方法測定細胞分泌的蛋白質,間接了解細胞因子的活性。其測定方法可分為(wei) 促進細胞增殖和增殖抑製法、抗病毒活性測定法、集落形成法、趨化作用測定法及細胞因子誘導產(chan) 物測定法等。前者的增殖細胞數與(yu) 細胞因子的含量成正比,而後者的增殖細胞數與(yu) 細胞因子的含量成反比。其原理是根據細胞因子特定的生物學活性,應用相應的指示係統,如各種依賴性株或靶細胞,同時與(yu) 標準品對比測定,從(cong) 而得知樣品中細胞因子的活性水平,一般以活性單位(U/mL)表示。
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