工作原理
本試劑盒采用雙位點夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），測定樣品中小鼠D二聚體(ti) （D2D）的水平。向預先包被小鼠D二聚體(ti) （D2D）抗體(ti) 的酶標孔中加入標準品、待測樣本和HRP標記的D二聚體(ti) （D2D）抗體(ti) ，經過溫育和洗滌，去除未結合的組分，然後再加入底物A、B，產(chan) 生藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺與(yu) 樣品中小鼠D二聚體(ti) （D2D）的濃度呈正相關(guan) 。
注意事項
1． 從(cong) 2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鍾。酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差
3． 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
4． 嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
5． 為(wei) 避免交叉汙染，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜。
6． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
7． 底物B對光敏感，避免長時間暴露於(yu) 光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標板內(nei) 的液體(ti) ；在實驗台上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nei) ，浸泡1-2分鍾。根據需要，重複此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融
操作程序
1． 分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl；在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為(wei) 5倍）。每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育60分鍾。
2． 棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿稀釋後洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。如此重複5次，拍幹。
3． 每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
4． 取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
5． 測定：以空白孔調零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。測定應在加終止液後15分鍾以內(nei) 進行。
6． 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由於(yu) 樣品稀釋了的，其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。
操作程序總結：