1. 實驗類型

xl18luck新利有多種類型，不過它們(men) 都有一個(ge) 共同特點，就是進行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體(ti) 進行捕獲。In-cell ELISA和酶聯免疫斑點ELISPOT是兩(liang) 種特殊的類型，In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yang) 的細胞進行固定和通透化，然後再用抗體(ti) 原位檢測。ELISPOT有點像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培養(yang) 細胞，然後在膜上檢測細胞分泌的抗原形成斑點。此外，我們(men) 還需要根據自身需要選擇96孔板或是384孔板進行ELISA實驗。
通常人們(men) 使用雙抗夾心法進行ELISA實驗，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體(ti) 和檢測抗體(ti) 之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過有時候雙抗夾心法並不是*選擇，例如有時候抗原特別小讓兩(liang) 個(ge) 大抗體(ti) 難以附著，又或者抗體(ti) 隻有一個(ge) 抗體(ti) 結合位點。在上述情況下，競爭(zheng) 性ELISA就更為(wei) 適用，這種方法是采用帶標記的純化抗原與(yu) 樣本中無標記的抗原進行競爭(zheng) ，以結合捕獲抗體(ti) 。
抗體(ti) 類型
單克隆抗體(ti) 和多克隆抗體(ti) 都能夠用於(yu) ELISA，實際上有時候二者結合效果更好。例如，對於(yu) 雙抗夾心法而言，用多抗進行捕獲而單抗進行檢測有時更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨後單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體(ti) 與(yu) 檢測抗體(ti) （不論多抗還是單抗）的配對很有講究。我們(men) 不希望捕獲抗體(ti) 與(yu) 檢測抗體(ti) 競爭(zheng) 抗原上的同一位點，為(wei) 此我們(men) 就需要確保捕獲抗體(ti) 和檢測抗體(ti) 所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體(ti) 和檢測抗體(ti) 之間發生了衝(chong) 突，就會(hui) 對實驗結果產(chan) 生較大影響。要避免這一問題，我們(men) 可以選擇購買(mai) “matched pair”的捕獲/檢測抗體(ti) 對，這些打包在一起的抗體(ti) 是商家經過驗證才推薦的好組合，
交叉反應
如果抗體(ti) 間發生衝(chong) 突或交叉反應就會(hui) 影響整個(ge) 實驗的特異性。其中抗體(ti) 來源所帶來的兼容性就是交叉反應的一個(ge) 因素。盡管現在購買(mai) 源自動物的抗體(ti) 越來越容易，我們(men) 仍有必要確認一下是否會(hui) 產(chan) 生交叉反應的問題。在用雙抗夾心法進行ELISA檢測時，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與(yu) 捕獲抗體(ti) 起反應。如果檢測用二抗與(yu) 捕獲抗體(ti) 結合，實驗特異性就會(hui) 大打折扣。通常我們(men) 選用源自不同宿主的捕獲抗體(ti) 和檢測一抗，來避免上述問題。
與(yu) 此同時，了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），以免這些buffer含有可能影響抗原抗體(ti) 相互作用的組分，使檢測結果收到影響。
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檢測方式

如今檢測ELISA有許多途徑，我們(men) 可以根據自己的偏好進行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應的可溶性產(chan) 物，抗體(ti) 上結合有相應的酶（例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP），而反應體(ti) 係中添加有相應的底物（如3，3-二氨基聯苯胺DAB）。這種酶促反應生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計進行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結合在一抗上，也可以結合在二抗上，還可以使用鏈黴親(qin) 和素標記的酶與(yu) 親(qin) 和素標記的一抗結合。此外ELISA的結果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學發光或顯色法檢測等。
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