大家在做實驗的時候,難免會(hui) 遇到不同的問題,比如標準曲線不好,試劑盒的回收率,假陰性,假陽性,實驗的重複性不好等等。現在我們(men) 就來一一解答用戶朋友們(men) 在實驗過程中遇到的各種疑問!
曲線問題:
1.OD值不正常:試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃
溫度控製不好,控製正確溫度
孵育時間不準確,控製孵育時間
洗滌時衝(chong) 擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增 加,洗滌4-5次,每孔250ul,然後拍幹
陽光直射,對著風直接吹,避風避光
酶標儀(yi) 的波長錯誤,酶標儀(yi) 的波長450nm
抗體(ti) 的稀釋錯誤,正確的稀釋抗體(ti)
水質問題,用娃哈哈礦泉水代替
2.白 板:洗滌液配製錯誤,正確的配製洗滌液
少加液體(ti) (錯加液體(ti) ),正確的步驟加液體(ti)
3.無 梯 度:標準品也汙染,換標準品點板
OD值不正常,控製溫度時間在做一次
人為(wei) 點板,不要點板/
4.線 性 不 好:OD值不正常,控製溫度時間在做一次
回收率:
1.空白管陽性高:樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率
空白管在實驗中被汙染,實驗中防止交叉汙染
水質原因用,娃哈哈礦泉水代替
2.偏 高:添加量不準確,的添加量
添加濃度不適合,添加合適的濃度
取液吹幹量多,準確的取液吹幹
取到其它相層液體(ti) ,取需用相吹幹
複溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋複溶液
3.偏 低:添加量不準確,的添加量
添加濃度不適合,添加合適的濃度
取液吹幹量少,準確的取液吹幹
複溶液稀釋錯誤或加入量多,正確的稀釋複溶液
假陰、陽性:
1,水質原因:點複溶液驗證,用娃哈哈礦泉水代替
2,實驗操作原因: 吸取到其它相吹幹,準確的取液吹幹
離心不*,延長離心時間
樣本的汙染,更換樣本
乳化未處理*,溫浴(70℃)處理乳化現象
3,儀(yi) 器試劑原因:離心管未清洗幹淨,正確的洗滌器具
有機溶劑的影響,做試劑空白看影響結果
4,衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質),更換衍生化試劑
5,與(yu) 曲線好壞相關(guan) ,,保證曲線的正常