酶免疫試驗之所以能成為(wei) 臨(lin) 床免疫檢驗中的主導技術，是與(yu) 它的方法上的特異性和靈敏性、操作上的簡便性以及試劑的穩定性分不開的，還有很重要的一點是，其對環境沒有汙染威脅。

盡管如此，作為(wei) 一項免疫檢驗技術，酶免疫試驗還是有其局限性的，不但所檢測的生物學體(ti) 液樣本如血清中有可能存在各種幹擾實驗的因素，而且在實驗過程中，影響結果的因素也很多，尤其是進行手工的ELISA測定時。

HBsAg的測定主要是弱陽性的問題，這與(yu) ELISA測定的“灰區”有關(guan) 係，處於(yu) cut-off值周圍亦即“灰區”的結果的可靠性通常較差，陽性當然需要確認，陰性卻也未必是真，這一點在血站篩檢獻血員血液時是非常重要的，必須引起注意，並采取適當的措施，防止此類嚴(yan) 重影響人們(men) 健康的傳(chuan) 染性疾病經輸血傳(chuan) 播，本書(shu) 後麵的有關(guan) 章還會(hui) 對此問題做詳細論述。此外，免疫測定的基礎是抗原抗體(ti) 的特異反應，因此，如檢測抗原，除了要求抗體(ti) （單抗或多抗）是特異的外，還要求待測抗原上必須存在有能與(yu) 所用抗體(ti) 結合的抗原決(jue) 定簇，如果因為(wei) 基因突變導致某些位點的不表達，或者結合位點因為(wei) 某些原因被封閉或阻斷，都會(hui) 影響抗體(ti) 與(yu) 抗原的結合，造成假陰性結果。

此外，在定性ELISA測定中，陽性判定值（CUT-OFF）的建立，是在一定的統計學基礎上的，相對於(yu) 某個(ge) 具體(ti) 的受檢者來說，其有可能並不具備正確性。例如，使用ELISA方法檢測抗HCV及抗HIV或HBsAg，有時候，檢測所得的陽性結也許並不是真正的陽性，而需要使用其他方法如重組免疫印跡（recombinant immunoblot as—say，RIBA）、蛋白印跡（Westernbl。t，WB）或中和試驗來確認，才能報告陽性。這裏抗HCV和抗HIV的檢測均使用病毒部分的基因工程抗原，其他一些病毒如流感病毒、腮腺炎病毒和水痘病毒等感染人體(ti) 後，亦或一些自身抗體(ti) ，也有可能會(hui) 導致假陽性反應。

如檢測抗體(ti) ，則要求所用包被抗原應盡可能包含所有的特異抗原決(jue) 定簇，同時又盡可能不含有非特異的成分，這一點往往由於(yu) 技術水平的限製而難以*做到，因此，從(cong) 某種意義(yi) 上來說，假陽性假陰性是不能*避免的，盡管通過努力，可以將其降至很低的程度。這也是建立臨(lin) 床免疫檢驗方法所努力的方向。