良好的儀(yi) 器和的操作是確保ELISA檢查成果牢靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體(ti) 的構成不一樣而有所區別，國內(nei) 醫學查驗通常均用板式點。
珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與(yu) 特別儀(yi) 器合作使用，兩(liang) 者均有詳細的使用說明，嚴(yan) 格遵循規則操作，必能得出的成果。
可用作ELISA測定的標本非常廣泛，體(ti) 液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、大便）等均可作標本以測定其間某種抗體(ti) 或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如血清、尿液），有些則需經預處理（如大便和某些分泌物）。大多數ELISA檢查均以血清為(wei) 標本。血漿中除尚富含纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等於(yu) 血清。製備血漿標本需借助於(yu) 抗凝劑，而血清標本隻需待血清自然凝結、除特別情況外，在醫學查驗中均以血清作為(wei) 檢查標本。在ELISA中血漿和血清可同等使用。
血清標本可按常規辦法收集，應留意防止溶血，紅細胞溶解時會(hui) 釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為(wei) 符號的ELISA測定中，溶血標本也許會(hui) 添加非特異性顯色。
血清標本宜在新鮮時檢查。如有細菌汙染，菌體(ti) 中也許富含內(nei) 源性HRP，也會(hui) 發作假陽性反應。如在冰箱中保留過久，其間的可發作聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。通常說來，在5天內(nei) 測定的血清標本可放置於(yu) 4℃，超越一星期測定的需低溫冰存。凍住血清融解後，蛋白質部分濃縮，分布不均，應充沛混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉澱的血清標本應先離心或過濾，澄清後再檢查。重複凍融會(hui) 使抗體(ti) 效價(jia) 下跌，所以測抗體(ti) 的血清標本如需保留作多次檢查，宜少數分裝冰存。保留血清自收集時就應留意無菌操作，也可參加恰當防腐劑。