是酶聯接免疫吸附劑測定的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之後發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來,發展十分迅速,目前已被廣泛用於(yu) 生物學和醫學科學的許多領域。
(一) 原理
ELISA是以免疫學反應為(wei) 基礎,將抗原、牽9體(ti) 的特異性反應與(yu) 酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由於(yu) 抗原、抗體(ti) 的反應在一種固相載體(ti) ──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育後,可通過洗滌除去多餘(yu) 的遊離反應物,從(cong) 而保證試驗結果的特異性與(yu) 穩定性。在實際應用中,通過不同的設計,具體(ti) 的方法步驟可有多種。
(二) 操作步驟
方法一 用於(yu) 檢測未知抗原的雙抗體(ti) 夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩衝(chong) 液將抗體(ti) 稀釋至蛋白質含量為(wei) 1~10μg/ml。在每個(ge) 聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nei) 溶液,用洗滌緩衝(chong) 液洗3次,每次3分鍾。。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於(yu) 上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然後洗滌。
3. 加酶標抗體(ti) :於(yu) 各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(ti) 0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:於(yu) 各反應孔中加入臨(lin) 時配製的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鍾。
5. 終止反應:於(yu) 各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可於(yu) 白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nei) 顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為(wei) 無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀(yi) 上,於(yu) 450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零後測各孔O·D值,若大於(yu) 規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為(wei) 陽性。
Sulfisoxazole Acetyl YSRIBIO171 80-74-0 200mg 磺胺乙酰異噁標準品
YSRIBIO1709 22884-10-2 30mg 唑來瞵酸相關(guan) 物質A標準品
(+)-Catechin YSRIBIO1708 154-23-4 25mg (+)-兒(er) 茶酸標準品
(E)-Thiothixene YSRIBIO1707 3313-27-7 100mg (E)-替沃噻噸標準品
1,4-Benzoquinone YSRIBIO1706 106-51-4 200mg 1,4-苯醌標準品
1,4-Sorbitan YSRIBIO1705 27299-12-3 300mg 1,4-脫水山梨糖醇標準品
1,6-anhydro-D-glucose YSRIBIO1704 498-07-7 50mg 1,6-脫水吡喃葡萄糖標準品
10-Formylfolic Acid YSRIBIO1703 134-05-4 25mg 10-甲酰葉酸標準品
12-Hydroxystearic Acid YSRIBIO1702 106-14-9 200mg 12-羥基硬脂酸標準品