TSZelisa試劑盒DRGT

原理:
采用雙抗體(ti) 夾心法測定人雄激素結合蛋白（ABP）水平。用純化的人雄激素結合蛋白（ABP）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相載體(ti) ，實驗時依次在微孔板中加入樣本及標準品，並加入 HRP 標記的 ABP 抗體(ti) ，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，反複洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為(wei) 藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guan) 。采用酶標儀(yi) 在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據標準曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度。 
實驗材料與(yu) 試劑配製：
1. 儀(yi) 器與(yu) 材料：酶標儀(yi) （使用前預熱30分鍾），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 緩衝(chong) 液使用：加5ul 的緩衝(chong) 液於(yu) 50ul 的樣品中，如果樣品量不夠或者不確定，緩衝(chong) 液和樣品的混合比例不要小於(yu) 1:10即可。
混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。
3. 洗液的配製：按1:100的比例配製洗液備用。
樣品收集、處理及保存
1. 細胞培養(yang) 上清：適用於(yu) 檢測體(ti) 外培養(yang) 的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鍾，收集上清。
2. 細胞：用PBS反複洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104
-106
/ml 左右，通過反複凍融，使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份，或
者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鍾，取上清待測。
4. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為(wei) 抗凝劑，混合後靜置10-20 分鍾後，以1000×g離心15分鍾，收集上
清。
5. 體(ti) 液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nei) 毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鍾，收集上清。
6. 組織標本：切取組織標本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀(yi) 將標本勻漿，以2000-3000
rmp離心20 分鍾，收集上清進行檢測。
7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反複冷凍。保存過程中如出現沉澱，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。
操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鍾。
2. 分組：取出 96 孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數，把剩餘(yu) 的板條繼續冷藏處理。分別設標準
品組（6 個(ge) 濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為(wei) 減少實驗誤差，保證準確性，建議設置複孔。
3. 加樣：依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液於(yu) 空白微孔中；空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水；其餘(yu) 微孔中加入 50ul
的待測樣本。
4. 加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液（空白對照孔除外）。
5. 溫育：酶標板用封板紙密封後，放入濕盒內(nei) 於(yu) 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗板：用稀釋後的洗滌液注滿每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標板 5 次，用吸水紙*拍幹。
7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 後，再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光反應 10-15 分鍾，加入 50ul 終止液。
9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。
注：讀板時必須拭幹板底殘留的液體(ti) 和手指痕跡，讀板時間控製在終止反應後的 30 分鍾內(nei) ，以免影響準確性。
注意事項：
1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉汙染。
2. 加樣：加樣時，要控製加樣速度，避免*孔與(yu) 最後一孔間的時間間隔過大，否則將會(hui) 導致不同的預孵育時間，從(cong) 而影響實驗的準確性以及重複性。
3. 孵育：嚴(yan) 格按照說明書(shu) 上規定的孵育時間和溫度進行。
4. 反應時間的控製：加入底物後請定時觀察反應孔的顏色變化，如果顏色較深，請提前加入終止液終止反應。
5. 建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數。
6. 建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個(ge) 標本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商溝通，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產(chan) 品本身以外的任何損失。
安全性
1． 避免人體(ti) 直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體(ti) ，請盡快用水衝(chong) 洗。
2． 實驗中不要進食、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒裏的任何成份。
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：2-8℃
2.有效期：6個(ge)