可溶性酸性轉化酶(SAI)測試盒

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可溶性酸性轉化酶(SAI)測試盒測定意義(yi) ：

蔗糖轉化酶(Invertase，Ivr)催化蔗糖不可逆地分解為(wei) 果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關(guan) 鍵酶之一。根據最適 pH，Ivr分為(wei) 酸性轉化酶(AI)和中性轉化酶(NI)兩(liang) 種類型。                          

AI的最適pH為(wei) 3～5。AI分為(wei) 可溶性AI(S-AI)和細胞壁不溶性AI(B-AI)兩(liang) 種類型。S-AI主要存在於(yu) 細胞液泡或自由空間中，最適 pH 為(wei) 4.5~5.0(酸性)，通過降解液泡中蔗糖，調節液泡中蔗糖的利用和果實內(nei) 糖類的積累。

測定原理：

S-AI催化蔗糖降解產(chan) 生還原糖，進一步與(yu) 3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定範圍內(nei) 510nm光吸收增加速率與(yu) S-AI活性成正比。

自備用品：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、台式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨(lin) 用前加入667μL無水乙醇，蓋緊後充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨(lin) 用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標準品：粉劑×1瓶，臨(lin) 用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標準液，4℃避光保存。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30 min，調節波長到570 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A空白管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

3. 標準管：取EP管，加入10μL標準品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A標準管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

4. 測定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A測定管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

注意：空白管和標準管隻需要測定一次。

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