海藻糖6磷酸合成酶(TPS)測試盒

商品詳情：
海藻糖6磷酸合成酶(TPS)測試盒測定意義(yi) ：

海藻糖是由兩(liang) 個(ge) 葡萄糖分子以α，α-1-1 糖苷鍵連接而成的一種非還原雙糖，廣泛存

在於(yu) 細菌、酵母菌、黴菌、食用菌、低等植物、昆蟲、無脊椎動物和高等植物等多種有機體(ti) 中。海藻糖的非還原性決(jue) 定了它對酸、堿、高溫等的穩定性。另外，它本身具有很強的吸水性，使它在生物體(ti) 內(nei) 具有抗脫水作用，在逆境條件下可通過識別外界刺激、產(chan) 生和傳(chuan) 遞信號、基因表達和代謝調節來保護植物免受不良環境的傷(shang) 害。

植物體(ti) 內(nei) 主要以葡萄糖為(wei) 底物合成海藻糖，該反應首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase，TPS)的作用下，催化尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和 6-磷酸葡萄糖反應生成中間產(chan) 物6-磷酸海藻糖，再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 (trehalose 6-phosphate phosphatase，TPP)的作用下去磷酸化，生成海藻糖。因此，測定TPS活性對於(yu) 研究植物逆境具有重要意義(yi) 。

測定原理：

TPS催化UDPG與(yu) G6P生成海藻糖-6-磷酸，同時產(chan) 生UDP；UDP在酸激酶與(yu) 乳酸脫氫酶作用下，氧化NADH為(wei) NAD+，NADH的下降速率與(yu) UDP含量成正比，通過340nm吸光度下降速率反映TPS活性。

需自備的儀(yi) 器和用品：

酶標儀(yi) 、水浴鍋、可調式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨(lin) 用前加入667μL無水乙醇，蓋緊後充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨(lin) 用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標準品：粉劑×1瓶，臨(lin) 用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標準液，4℃避光保存。
商品屬性：

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30 min，調節波長到570 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A空白管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

3. 標準管：取EP管，加入10μL標準品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A標準管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

4. 測定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A測定管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

注意：空白管和標準管隻需要測定一次。

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