線粒體蘋果酸脫氫酶(MDHm)測試盒

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線粒體(ti) 蘋果酸脫氫酶(MDHm)測試盒測定意義(yi) ：

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中，線粒體(ti) 中MDH是TCA循環的關(guan) 鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chan) 物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體(ti) 的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭係統、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶特異性，MDH分為(wei) NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常隻含有NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH分布於(yu) 細胞質和線粒體(ti) 中。

測定原理：

MDHm催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。

需自備的儀(yi) 器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、台式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨(lin) 用前加入667μL無水乙醇，蓋緊後充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨(lin) 用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標準品：粉劑×1瓶，臨(lin) 用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標準液，4℃避光保存。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30 min，調節波長到570 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A空白管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

3. 標準管：取EP管，加入10μL標準品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A標準管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

4. 測定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A測定管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

注意：空白管和標準管隻需要測定一次。

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