NAD激酶(NADK)測試盒

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NAD激酶(NADK)測試盒測定意義(yi) ：

NADK(EC 2.7.1.23)廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中，是目前所發現的生物體(ti) 內(nei) 惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或無機多聚磷酸[poly(P)]作為(wei) 磷酰基供體(ti) 進行磷酸化反應，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及調節NAD(H)與(yu) NADP(H)的平衡上具有重要作用。

測定原理：

NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為(wei) NADPH；NADPH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(MTT)，通過在600 nm下測定MTT的還原速度(吸光值的變化)可反映出NADK活性的大小。

需自備的儀(yi) 器和用品：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、恒溫水浴鍋、台式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配製：

試劑一：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) ×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨(lin) 用前加入667μL無水乙醇，蓋緊後充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨(lin) 用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標準品：粉劑×1瓶，臨(lin) 用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標準液，4℃避光保存。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30 min，調節波長到570 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A空白管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

3. 標準管：取EP管，加入10μL標準品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A標準管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

4. 測定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻後蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置於(yu) 沸水浴中保溫15 min，冷卻後反複顛倒EP管數次，於(yu) 570nm測定吸光值，記為(wei) A測定管。顯色後務必在30min內(nei) 測完。

注意：空白管和標準管隻需要測定一次。

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