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超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(WST8法)

簡要描述:

超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(WST8法)廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中,催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不僅(jin) 是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化係統中具有重要作用。

更新時間:2024-09-02;廠商性質:經銷商;覽量:1374

超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(WST8法)

商品詳情:
測定意義(yi) :

 SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中,催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不僅(jin) 是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化係統中具有重要作用。

貨號

規格

檢測方法

YSH3271

100管/96樣

微量法

YSH3271-1



測定原理:

通過氧化酶反應係統產(chan) 生超氧陰離子(O2-),O2-可與(yu) WST-8反應產(chan) 生水溶性染料甲臢,後者在450nm處有吸收;SOD可清除O2-,從(cong) 而抑製了甲臢的形成;反應液黃色越深,說明SOD活性愈低,反之活性越高。

需自備的儀(yi) 器和用品:

酶標儀(yi) 、離心機、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水
樣品中AA提取:

1.按照組織質量(g):試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行室溫勻漿,然後轉移到1.5 mL EP 管中,蓋緊後(防止水分散失)置於(yu) 沸水浴提取15 min;自來水冷卻後,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測。

2.細菌或培養(yang) 細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ,離心後棄上清;按照細菌或細胞數量(104個(ge) ):試劑一體(ti) 積(mL)為(wei) 500~1000:1的比例(建議500萬(wan) 細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重複30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

3.血清等液體(ti) :直接檢測。

計算公式如下:

1、血清(漿)LAP活力的計算:

單位的定義(yi) :每mL血清(漿)每分鍾生成1 nmol的對硝基苯胺定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義(yi) :每mg組織蛋白每分鍾生成1 nmol 對硝基苯胺定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義(yi) :每g組織每分鍾生成1 nmol 對硝基苯胺定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義(yi) :每1萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每分鍾生成1 nmol 對硝基苯胺定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總:反應體(ti) 係總體(ti) 積,2×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光係數,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體(ti) 積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體(ti) 積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;2000:細菌或細胞總數,2000萬(wan) 。

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注意事項:

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨(lin) 用前配製,且避光保存,配製好未使用完的4℃保存且3天內(nei) 使用完畢。

2. 為(wei) 保證實驗結果的準確性,需先取1-2個(ge) 樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高於(yu) 2.5),用蒸餾水稀釋後再測定。

3. 與(yu) 茚三酮反應在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測定結果不含這兩(liang) 種氨基酸的量。

4.檢出限為(wei) 100μmol/L。


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